Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Կատուի համարը՝ HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit-ը (UDG Plus) մուլտիպլեքսային քանակական PCR հավաքածու է, որը հիմնված է ՌՆԹ-ի վրա որպես ձևանմուշ:Փորձի ընթացքում նույն խողովակում իրականացվել է հակադարձ տրանսկրիպցիա և քանակական PCR, ինչը պարզեցրել է փորձարարական գործողությունը և նվազեցրել աղտոտման վտանգը:Այս փաթեթում առաջին շղթայի cDNA-ն արդյունավետորեն սինթեզվեց ջերմակայուն հակադարձ տրանսկրիպտազի միջոցով և քանակապես ուժեղացվեց HotStart Tag ԴՆԹ պոլիմերազի միջոցով:Հավաքածուն հիմնականում պարունակում է օպտիմալացված MP բուֆեր, ֆերմենտների խառնուրդ և այլն: Բուֆերային լուծույթն արդեն պարունակում է Mg2+և dNTP:Բացի այդ, ավելացվում են այն գործոնները, որոնք կարող են արդյունավետորեն արգելակել ոչ սպեցիֆիկ PCR ամպլիֆիկացիան և բարելավել բազմակի qPCR ռեակցիաների ուժեղացման արդյունավետությունը, ինչը կարող է ապահովել ուժեղացման արդյունավետությունը և իրականացնել մինչև բազմակի ուժեղացման ռեակցիա:Աերոզոլային աղտոտման վտանգը արդյունավետորեն կանխելու համար ավելացվել է dUTP/UDG համակարգը:
Բաղադրիչներ
1. Բուֆեր
2. Ֆերմենտային խառնուրդ
Հստակեցում
| Թեժ մեկնարկ | Ներկառուցված տաք մեկնարկ |
| Հայտնաբերման մեթոդ | Պրայմեր-զոնդի հայտնաբերում |
| PCR մեթոդ | Մեկ քայլ RT-qPCR |
| Պոլիմերազ | Taq ԴՆԹ պոլիմերազ |
| Նմուշի տեսակը | ԴՆԹ |
Պահպանման պայմանները
Ապրանքը առաքվում է չոր սառույցով և կարող է պահպանվել -25~-15℃ ջերմաստիճանում 1 տարի:Այն պետք է խուսափել հաճախակիսառեցնել-հալեցնել.Խորհուրդ է տրվում խնայել առանձին։
Հրահանգներ
1.Արձագանք Համակարգ
| Բաղադրիչներ | Ծավալը (μL) | Վերջնական համակենտրոնացում |
| 2 × MP բուֆեր | 12.5 | 1× |
| Ֆերմենտային խառնուրդ | 1 | - |
| Primer/Probe խառնուրդ (2,5 մկՄ) | 3 | 0,3 մկմ |
| Կաղապար ՌՆԹ | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | մինչև 25 | - |
Նշումներ:
Օգտագործելուց առաջ համոզվեք, որ լավ խառնեք, խուսափեք ուժեղ թրթռումներից առաջացած ավելորդ փուչիկներից:
ա.Այբբենարանի կոնցենտրացիան. Այբբենարանի խառնուրդ, ներառյալ մուլտիպլեքսային այբբենարան, կախված իրավիճակից, այբբենարանի օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է լինել 0.l-ից 1.0 μM միջակայքում:
բ.Զոնդի կոնցենտրացիան. Զոնդի խառնուրդ, ներառյալ մուլտիպլեքսային զոնդի պիտակավորման տարբերության ֆլուորեսցենտային խումբը, կախված իրավիճակից, զոնդի օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է լինել 0,05-ից 0,5 մկմ:
գ.Կաղապարի նոսրացում. qPCR-ը շատ զգայուն է և խորհուրդ է տրվում նոսրացնել կաղապարը:Վերահսկիչ Ct արժեքը հարմար է 20-ից 35-ի միջև:
դ.Համակարգի պատրաստում. Խնդրում ենք պատրաստել գերմաքուր աշխատանքային սեղանի վրա, ինչպես նաև պիպետտորում և ռեակցիոն խողովակում՝ առանց նուկլեազի մնացորդի;Խորհուրդ է տրվում օգտագործել ատրճանակի գլուխը ֆիլտրի տարրով:Խուսափեք խաչաձեւ աղտոտումից և աերոզոլային աղտոտումից:
2. Օպտիմիզացված ՀեծանվավազքԱրձանագրություն
| Ցիկլ քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| Հակադարձ արտագրում | 50℃ա | 20 րոպե | 1 |
| Նախնական-դենատուրացիա | 95℃ | 5 րոպե | 1 |
| Ուժեղացման ռեակցիա | 95℃ | 15 վրկ |
40-45 թթ |
| 60℃ b | 30 վրկ c |
Նշումներ:
ա.Հակադարձ արտագրում. Ջերմաստիճանը կարող է ընտրել 42°C կամ 50°C:
բ.Ուժեղացման ռեակցիա. Ջերմաստիճանը ճշգրտվում է նախագծված պրայմերների Tm արժեքին համապատասխան:
գ.Լյումինեսցենտային ազդանշանի ձեռքբերում. Խնդրում ենք սահմանել փորձարարական ընթացակարգը՝ համաձայն գործիքի ձեռնարկի պահանջների:
Նշումներ
Խնդրում ենք կրել անհրաժեշտ PPE, ինչպիսիք են լաբորատոր վերարկու և ձեռնոցներ՝ ձեր առողջությունն ու անվտանգությունն ապահովելու համար:
