Proteinase K (լիոֆիլացված փոշի)

Կատուի համարը՝ HC4500A

Փաթեթը՝ 100մգ/1գ/10գ/100գ/500գ

Առանց DNase, RNase, Nickase

Ակտիվություն՝ ≥30 U/mg

Պահպանման ժամկետը 3 տարի

Տեղափոխում սենյակային ջերմաստիճանում

Մեկ խմբաքանակի հզորությունը 30 կգ

Ուղարկել հարցում

ապրանքի նկարագրությունը

Ապրանքի մանրամասն

Տվյալներ

Կատուի համարը՝ HC4500A

Proteinase K-ն կայուն սերինային պրոթեզերա է՝ լայն սուբստրատի առանձնահատկությունով:Այն քայքայում է բազմաթիվ սպիտակուցներ բնիկ վիճակում նույնիսկ լվացող միջոցների առկայության դեպքում:Բյուրեղների և մոլեկուլային կառուցվածքի ուսումնասիրությունների ապացույցները ցույց են տալիս, որ ֆերմենտը պատկանում է սուբտիլիսինների ընտանիքին ակտիվ տեղամասի կատալիտիկ եռյակով (Asp₃₉-Նրա₆₉- Սեր₂₂₄).Պառակտման գերակշռող տեղը պեպտիդային կապն է, որը հարում է ալիֆատիկ և արոմատիկ ամինաթթուների կարբոքսիլ խմբին՝ արգելափակված ալֆա ամինո խմբերով:Այն սովորաբար օգտագործվում է իր լայնկոնկրետություն։

Նախորդը: Proteinase K NGS (փոշի) HC4507A

Հաջորդը: 2×PCR Super Mix (ներկանյութով) HCR2012A

Պահպանման պայմանները

2-8℃ կարճաժամկետ պահեստավորում,-25~-15℃ երկարաժամկետ պահեստավորում:Չոր փոշու կարգավիճակը -25~-15℃ ուժի մեջ է 3 տարի;ֆերմենտի փոշին պետք է լուծարվի համապատասխան ծավալի մեջ:

Հստակեցում

Արտաքին տեսք	Սպիտակից մինչև սպիտակ ամորֆ լիոֆիլացված փոշի
Գործունեություն	≥30 U/mg
DNase	Ոչ մեկը չի հայտնաբերվել
RNase	Ոչ մեկը չի հայտնաբերվել

Հատկություններ

EC համարը	3.4.21.64 (Recombinant Tritirachium ալբոմից)
Մոլեկուլային քաշը	29 կԴա (SDS-PAGE)
Իզոէլեկտրական կետ	7.81
Օպտիմալ pH	7.0-12.0 Նկ.1
Օպտիմալ ջերմաստիճան	65 ℃ Նկ.2
pH կայունություն	pH 4.5-12.5 (25℃, 16h) Նկ.3
Ջերմային կայունություն	50℃-ից ցածր (pH 8.0, 30 րոպե) Նկ.4
Ակտիվատորներ	SDS, միզանյութ
Ինհիբիտորներ	դիիզոպրոպիլ ֆտորոֆոսֆատ;ֆենիլմեթիլսուլֆոնիլ ֆտորիդ

Դիմումներ

1. Գենետիկ ախտորոշիչ հավաքածու

2. ՌՆԹ-ի և ԴՆԹ-ի արդյունահանման փաթեթներ

3. Հյուսվածքներից ոչ սպիտակուցային բաղադրիչների հեռացում, սպիտակուցային կեղտերի քայքայում, ինչպիսիք են ԴՆԹ պատվաստանյութերը և հեպարինի պատրաստումը

4. Քրոմոսոմի ԴՆԹ-ի պատրաստում իմպուլսային էլեկտրոֆորեզով

5. Western blot

6. Ֆերմենտային գլիկոզիլացված ալբումինի ռեագենտներ in vitro ախտորոշում

Նախազգուշական միջոցներ

Օգտագործելիս կամ կշռելիս կրեք պաշտպանիչ ձեռնոցներ և ակնոցներ, իսկ օգտագործելուց հետո լավ օդափոխեք:Այս միջոցը կարող է առաջացնել մաշկի ալերգիկ ռեակցիա և աչքի լուրջ գրգռում:Եթե ներշնչվի, այն կարող է առաջացնել ալերգիայի կամ ասթմայի ախտանիշներ կամ շնչառություն:Կարող է առաջացնել շնչառական գրգռում:

Փորձարկում

Միավորի սահմանում

Մեկ միավորը (U) սահմանվում է որպես կազեինի հիդրոլիզացման համար անհրաժեշտ ֆերմենտի քանակություն՝ րոպեում 1 մկմոլ թիրոզին արտադրելու համար հետևյալ պայմաններում.

Ռեակտիվների պատրաստում

Ռեակտիվ I. 1 գ կաթի կազեինը լուծվել է 50 մլ 0,1 մ նատրիումի ֆոսֆատի լուծույթում (pH 8,0), ինկուբացվել է 65-70 ℃ ջրի մեջ 15 րոպե, խառնվել և լուծվել, սառեցվել է ջրով, նատրիումի հիդրօքսիդով կարգավորվել pH 8,0 ծավալով և ֆիքսվել: 100 մլ.

Ռեակտիվ II՝ 0,1 մ տրիքլորքացախաթթու, 0,2 մ նատրիումի ացետատ, 0,3 մ քացախաթթու:

Ռեակտիվ III՝ 0.4M Na₂CO₃լուծում.

Ռեակտիվ IV. Ֆորինտի ռեակտիվը 5 անգամ նոսրացված է մաքուր ջրով:

Ռեակտիվ V՝ ֆերմենտային լուծիչ՝ 0,1 մ նատրիումի ֆոսֆատի լուծույթ (pH 8,0):

Ռեակտիվ VI՝ թիրոզինի լուծույթ՝ 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 մմոլ/մլ թիրոզին՝ լուծված 0,2 մ HCL-ով:

Ընթացակարգը

1. 0,5 մլ ռեակտիվ I-ը նախապես տաքացվում է մինչև 37℃, ավելացնում ենք 0,5 մլ ֆերմենտային լուծույթ, լավ խառնում և ինկուբացնում 37℃ ջերմաստիճանում 10 րոպե:

2. Ռեակցիան դադարեցնելու համար ավելացրեք 1 մլ ռեակտիվ II, լավ խառնեք և շարունակեք ինկուբացիան 30 րոպե:

3. Ցենտրիֆուգային ռեակցիայի լուծույթ:

4. Վերցրեք 0,5 մլ վերին նյութ, ավելացրեք 2,5 մլ ռեակտիվ III, 0,5 մլ ռեակտիվ IV, լավ խառնեք և ինկուբացրեք 37℃ ջերմաստիճանում 30 րոպե:

5. ՕԴ_{660 թ}որոշվել է որպես ՕԴ₁;դատարկ հսկիչ խումբ. 0.5 մլ ռեակտիվ V օգտագործվում է ֆերմենտային լուծույթը փոխարինելու համար՝ OD որոշելու համար_{660 թ}որպես OD₂, ΔOD=OD₁-ՕԴ₂.

6. L-տիրոզինի ստանդարտ կոր՝ 0,5 մլ տարբեր կոնցենտրացիաների L տիրոզինի լուծույթ, 2,5 մլ ռեակտիվ III, 0,5 մլ ռեակտիվ IV 5 մլ ցենտրիֆուգային խողովակում, ինկուբացնել 37℃-ում 30 րոպե, հայտնաբերել OD_{660 թ}L-թիրոզինի տարբեր կոնցենտրացիաների համար, այնուհետև ստացվեց ստանդարտ կորը Y=kX+b, որտեղ Y-ը L-տիրոզինի կոնցենտրացիան է, X-ը՝ OD:_{600 թ}.

Հաշվարկ

2. Ռեակցիայի լուծույթի ընդհանուր ծավալը (մլ)

0.5՝ ֆերմենտային լուծույթի ծավալը (մլ)

0.5. Ռեակցիոն հեղուկի ծավալը, որն օգտագործվում է քրոմոգեն որոշման մեջ (մլ)

10: Արձագանքման ժամանակը (րոպե)

DfԲազմաթիվ նոսրացում

CՖերմենտի կոնցենտրացիան (մգ/մլ)

Հղումներ

1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.

2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Բիոֆիզ.Ռես.կոմուն.(1971);44:513.

3. Հիլզ, Հ.և այլն,Եվր.J. Biochem.(1975);56:103–108.

4. Սեմբրուկ Ջet ալ., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989):

Ֆիգուրներ

Նկ. 1Օպտիմալ pH

100մՄ բուֆերային լուծույթ՝ pH6.0-8.0, Na-ֆոսֆատ;pH8.0-9.0, Tris-HCL;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH.Ֆերմենտի կոնցենտրացիան՝ 1մգ/մլ

Նկ. 2 Օպտիմալ ջերմաստիճան

Արձագանք 20 մՄ K-ֆոսֆատ բուֆերային pH 8.0:Ֆերմենտի կոնցենտրացիան՝ 1մգ/մլ

Նկ. 3 pH Կայունություն

25℃, 16 ժ-բուժում 50մՄ բուֆերային լուծույթով. pH 4,5-5,5, ացետատ;pH 6,0-8,0, Na-ֆոսֆատ;pH 8,0-9,0, տրիս-HCL.pH 9,0-12,5, Glycine-NaOH:Ֆերմենտի կոնցենտրացիան՝ 1մգ/մլ

Նկ. 4 Ջերմային կայունություն

30 րոպե բուժում 50 մՄ Tris-HCL բուֆերով, pH 8.0:Ֆերմենտի կոնցենտրացիան՝ 1մգ/մլ

Նկ. 5 Պահպանում կայունty at 25℃