2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Կատուի համարը՝ HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) նախագծված է PCR-ն իրականացնելու անմիջապես նմուշներից՝ առանց ԴՆԹ-ի արդյունահանման կամ նմուշի պատրաստման:Այս ռեագենտը բաղկացած է տաք մեկնարկային ԴՆԹ պոլիմերազից, ուրացիլ ԴՆԹ գլիկոզիլազից (UNG), RNase Inhibitor-ից, MgCl-ից:2, dNTP-ներ (dUTP-ով dTTP-ի փոխարեն) և կայունացուցիչներ՝ քանակական PCR-ի համար (qPCR):Այս ռեագենտը ձևավորում է բարձր արգելակող հանդուրժողականություն, և, հետևաբար, այն կարող է ուղղակիորեն կիրառվել նմուշների հայտնաբերման համար, ինչպիսիք են կոկորդի շվաբրը, թուքը, հակամակարդելի ամբողջ արյունը, պլազմային և շիճուկը՝ առանց ԴՆԹ-ի արդյունահանման:Ռեագենտը օգտագործում է հատուկ բուֆեր qPCR-ի համար հակաինհիբիտոր ԴՆԹ պոլիմերազի և UNG ֆերմենտի խառը ֆերմենտներով:Հետևաբար, այն կարող է ձեռք բերել թիրախային գեների լավ ուժեղացում ինհիբիտորներ պարունակող նմուշներում և արգելակել PCR մնացորդային և աերոզոլային աղտոտման հետևանքով առաջացած կեղծ դրական ուժեղացումը:Այս ռեագենտը համատեղելի է լյումինեսցենտային քանակական PCR գործիքների մեծ մասի հետ, ինչպիսիք են Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche և այլն:
Բաղադրիչներ
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Պահպանման պայմանները
Բոլոր բաղադրիչները պետք է պահվեն -20℃ ջերմաստիճանում երկարաժամկետ պահպանման համար և 4℃ մինչև 3 ամիս:Խնդրում ենք հալվելուց հետո մանրակրկիտ խառնել և օգտագործելուց առաջ ցենտրիֆուգել:Խուսափեք հաճախակի սառցակալումից:
Հեծանվավազքի արձանագրություն
| Քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլ |
| Մարսողություն | 50℃ | 2 րոպե | 1 |
| Պոլիմերազի ակտիվացում | 95℃ | 1-5 րոպե | 1 |
| Դենատուրա | 95℃ | 10-20-ական թթ | 40-50 թթ |
| Կառուցում/ընդլայնում | 56-64℃ | 20-60-ական թթ |
Pipetting հրահանգներ
| Ռեակտիվ | Ծավալը մեկ ռեակցիա | Մեկ ռեակցիայի ծավալը | Վերջնական համակենտրոնացում |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 մկլ | 25 մկլ | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0,5 մկլ | 1 մկլ | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1 մկլ | 2 մկլ | 1× |
| Նմուշ3, 4 | - | - | - |
| դդՀ2O | - | - | - |
| Ընդհանուր ծավալը | 25 մլ | 50 մլ | - |
1. Այբբենարանի վերջնական կոնցենտրացիան սովորաբար 0,2 մկմ է:Ավելի լավ արդյունքների համար այբբենարանի կոնցենտրացիան կարող է օպտիմիզացվել 0,2-1 μM միջակայքում:
2. Ընդհանուր առմամբ, զոնդի կոնցենտրացիան կարող է օպտիմիզացվել 0,1-0,3 մկմ միջակայքում:Զոնդի օպտիմալ կոնցենտրացիան կապված է իրական ժամանակում PCR ուժեղացման գործիքի, զոնդի տեսակի և լյումինեսցենտային պիտակավորման նյութի տեսակի հետ:Խնդրում ենք ծանոթանալ գործիքի ձեռնարկին կամ յուրաքանչյուր լյումինեսցենտային զոնդի հատուկ պահանջներին:
3. Տարբեր տեսակի նմուշները պարունակում են տարբեր տեսակի և բովանդակության արգելակիչ և թիրախային գենի պատճենի քանակ:Նմուշի ծավալը պետք է դիտարկվի ըստ փաստացի վիճակի:Կատարեք նմուշի նոսրացում՝ անհրաժեշտության դեպքում ավելացնելով նուկլեազազերծ ջուր կամ TE բուֆեր:
4. Տարբեր նմուշների առաջարկվող ծավալը.
| Նմուշ | Ծավալը մեկ 50-ի համար μL ռեակցիա | Առավելագույնը հարաբերակցությունը |
| Anticoagulated ամբողջական արյուն | 2,5 մլ | 5% |
| Պլազմա | 15 մլ | 30% |
| Շիճուկ | 10 մլ | 20% |
| Կոկորդի շվաբր | 10 մլ | 20% |
| Թուք | 10 մլ | 20% |
Որակի հսկողություն
1. Ֆունկցիայի հայտնաբերում. qPCR-ի զգայունություն, առանձնահատկություն և կրկնելիություն:
2. Էկզոգեն նուկլեազային ակտիվություն չկա. չկա էկզոգեն էնդոնուկլեազ և էկզոնուկլեազային աղտոտում:
Ապրանքի նշումներ
1. Այս արտադրանքը օգտագործում է նոր տեսակի տաք մեկնարկային ԴՆԹ պոլիմերազ, որը կարող է ակտիվացվել 1-5 րոպեում: Քանի որ դրա ռեակցիայի բուֆերը օպտիմիզացվել է, այն ավելի հարմար է կրկնակի կամ բազմակի ֆլուորեսցենտային քանակական PCR-ի համար՝ օգտագործելով զոնդային մեթոդը:
2. Եթե PCR ուժեղացման Rn արժեքը չափազանց ցածր է կամ ուժեղացումը ակնհայտորեն արգելակված է, նմուշի քանակի նվազումը, ռեակցիայի ծավալի մեծացումը կամ նմուշի նախկին նոսրացումը կարող են բարելավել արդյունքները:
3. Արյան, թուքի, մեզի, կոկորդի շվաբրի և այլնի հավաքումը պետք է համապատասխանի կլինիկական չափանիշների պահանջներին, և թարմ նմուշը կարող է օգտագործվել նուկլեինաթթվի դեգրադացիան կանխելու համար:
4. Քանի որ տարբեր ամպլիկոններ ունեն օգտագործման տարբեր արդյունավետություն dUTP-ի նկատմամբ և զգայունություն UNG-ի նկատմամբ, ռեակտիվները պետք է օպտիմիզացվեն, եթե UNG համակարգը օգտագործելիս հայտնաբերման զգայունությունը նվազում է:Անհրաժեշտության դեպքում դիմեք մեզ տեխնիկական աջակցության համար:
5. Մեկ փուլային ռեակցիաների միջև փոխադրվող PCR արտադրանքի ուժեղացումից խուսափելու համար ուժեղացման համար պահանջվում է հատուկ փորձնական տարածք և պիպետ:Գործեք ձեռնոցներով և հաճախակի փոխվեք և մի բացեք ռեակցիայի խողովակը PCR ուժեղացումից հետո:
