5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Կատուի համարը՝ HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) բարձր կայուն մեկ խողովակի վրա հիմնված խառնուրդ է, որը հարմար է մեկ քայլով հակադարձ տրանսկրիպցիայի և քանակական PCR-ի (qRT-PCR) համար:Այն աջակցում է պրայմերների և զոնդերի նախնական խառնմանը և կայուն է մնում ցածր ջերմաստիճանում երկար ժամանակ պահելուց հետո:Փորձարկվող նմուշը կարող է ուղղակիորեն ավելացվել օգտագործման ժամանակ՝ առանց լրացուցիչ խողովակի բացման/խողովակների տեղադրման:Այս արտադրանքը ապահովում է բաղադրիչներ, օրինակ՝ տաք մեկնարկային ԴՆԹ պոլիմերազ, M-MLV, ջերմակայուն ուրացիլ ԴՆԹ գլիկոզիլազա (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTP-ներ (dUTP-ով dTTP-ի փոխարեն) և կայունացուցիչներ:Գենետիկորեն ձևափոխված արագ ուժեղացման հակադարձ տրանսկրիպտազի և ԴՆԹ պոլիմերազի միջոցով հնարավոր է PCR ամպլիֆիկացիան ավարտել 20-40 րոպեի ընթացքում:Այս ռեագենտը օգտագործում է հատուկ բուֆեր qPCR-ի համար հակա-ինհիբիտորական ուժեղացման ֆերմենտի և UNG ֆերմենտի խառը ֆերմենտներով:Հետևաբար, այն կարող է ձեռք բերել թիրախային գեների լավ ուժեղացում և կանխել PCR մնացորդային և աերոզոլային աղտոտվածության հետևանքով առաջացած կեղծ ուժեղացումը:Այս ռեագենտը համատեղելի է ֆլուորեսցենտային քանակական PCR գործիքների մեծ մասի հետ, ինչպիսիք են Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad և Roche:
Բաղադրիչ
1.25×Neoscript Արագ RTase/UNG Միքս
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Պահպանման պայմանները
Բոլոր բաղադրիչները պետք է պահվեն -20℃ ջերմաստիճանում երկարաժամկետ պահպանման համար և 4℃ մինչև 3 ամիս:Խնդրում ենք հալվելուց հետո մանրակրկիտ խառնել և օգտագործելուց առաջ ցենտրիֆուգել:Խուսափեք հաճախակի սառցակալումից:
qRT-PCR ռեակցիայի համակարգի պատրաստում
| Բաղադրիչներ | 25μLՀամակարգ | 50μLՀամակարգ | Վերջնական համակենտրոնացում |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5 մլ | 10 մլ | 1× |
| 25×Neoscript Արագ RTase/UNG Միքս | 1 մլ | 2 մկլ | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1 մլ | 2 մկլ | 1× |
| Կաղապար ՌՆԹb | – | – | – |
| դդՀ2O | Մինչև 25 մլ | Մինչև 50 մկլ | – |
1) ա. Այբբենարանի վերջնական կոնցենտրացիան սովորաբար 0.2 μM է:Ավելի լավ արդյունքների համար այբբենարանի կոնցենտրացիան կարող է օպտիմիզացվել 0,2-1 μM միջակայքում:Ընդհանուր առմամբ, զոնդի կոնցենտրացիան կարող է օպտիմիզացվել 0,1-0,3 մկմ միջակայքում:
2) բ. Արագ PCR պրոցեդուրա օգտագործելիս պրայմերների և զոնդերի կոնցենտրացիայի ավելացումը կարող է հանգեցնել ուժեղացման ավելի լավ արդյունքների, և դրանց հարաբերակցությունը պետք է համապատասխանաբար օպտիմալացվի:
3) Տարբեր տեսակի նմուշները պարունակում են տարբեր տեսակի արգելիչներ և թիրախային գենի պատճենների քանակ:Նմուշի ծավալը պետք է դիտարկվի ըստ փաստացի վիճակի:Անհրաժեշտության դեպքում նմուշը նոսրացրեք նուկլեազազերծ ջրով կամ TE բուֆերով:
Ռեակցիան Գպայմանները
| ՊՇՌ կանոնավոր ընթացակարգ | Արագ PCR ընթացակարգ | ||||||
| Ընթացակարգը | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլ | Ընթացակարգը | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլ |
| Հակադարձ արտագրում | 50℃ | 10-20 րոպե | 1 | Հակադարձ արտագրում | 50℃ | 5 րոպե | 1 |
| Պոլիմերազ Ակտիվացում | 95℃ | 1-5 րոպե | 1 | Պոլիմերազ Ակտիվացում | 95℃ | 30-ական թթ | 1 |
| Դենատուրացիա | 95℃ | 10-20-ական թթ | 40-50 թթ | Դենատուրացիա | 95℃ | 1-3 վրկ | 40-50 թթ |
| Հալեցում և Ընդլայնումը | 56-64℃ | 20-60-ական թթ | Հալեցում և Ընդլայնումը | 56-64℃ | 3-20-ական թթ | ||
Որակի հսկողություն
1.Ֆունկցիայի հայտնաբերում. qPCR-ի զգայունություն, առանձնահատկություն և կրկնելիություն:
2.Էկզոգեն նուկլեազային ակտիվություն չկա. չկա էկզոգեն էնդոնուկլեազ և էկզոնուկլեազային աղտոտում:
Նշումներ
1.Արագ ԴՆԹ պոլիմերազի ուժեղացման արագությունը 1կբ/10 վրկ-ից ոչ պակաս է:Տարբեր PCR գործիքներ ունեն ջեռուցման և հովացման տարբեր արագություններ, ջերմաստիճանի վերահսկման ռեժիմներ և ջերմային հաղորդունակություն, և, հետևաբար, ձեր այբբենարանի/զոնդի կոնցենտրացիայի և գործարկման մեթոդի օպտիմալացումը ձեր հատուկ արագ PCR գործիքի հետ համատեղ կարևոր է:
2.Այս արտադրանքը լայն կիրառելի է, և այն հարմար է բարձր զգայունության մոլեկուլային ախտորոշման համար:Եռաստիճան ՊՇՌ մեթոդը խորհուրդ է տրվում պրայմերների համար ցածր եռացման ջերմաստիճանով կամ 200 bp-ից ավելի երկար բեկորների ուժեղացման համար:
3.Քանի որ տարբեր ամպլիկոններ ունեն dUTP-ի օգտագործման տարբեր արդյունավետություն և տարբեր զգայունություն UNG-ի նկատմամբ, ռեակտիվները պետք է օպտիմալացվեն, եթե UNG համակարգը օգտագործելիս հայտնաբերման զգայունությունը նվազում է:Անհրաժեշտության դեպքում դիմեք մեզ տեխնիկական աջակցության համար:
4.Փոխադրվող PCR արտադրանքի ուժեղացումից խուսափելու համար ուժեղացման համար պահանջվում է հատուկ փորձնական տարածք և պիպետ:Աշխատեք ձեռնոցներով և հաճախակի փոխվեք և մի բացեք PCR խողովակը ուժեղացումից հետո:
