Superstart qPCR Premix plus-UNG
Կատուի համարը՝ HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG-ը մասնագիտացված ռեագենտ է, որը նախատեսված է իրական ժամանակում PCR որակական և քանակական ռեակցիաների համար՝ օգտագործելով զոնդի վրա հիմնված հայտնաբերում, որը մշակվել է հատուկ լիոֆիլացման գործընթացների համար:Այն պարունակում է Hotstart Taq plus (DG) նոր տաք մեկնարկային ֆերմենտ, որն ունի իր Taq ֆերմենտային ակտիվությունը փակված սենյակային ջերմաստիճանում, արդյունավետորեն արգելակում է ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացումը, որն առաջանում է ցածր ջերմաստիճանի պայմաններում պրայմերների ոչ սպեցիֆիկ եռացման կամ պրայմերային դիմերի ձևավորման արդյունքում՝ այդպիսով բարելավելով: ուժեղացման ռեակցիայի առանձնահատկությունը.Այս ռեագենտը օգտագործում է օպտիմիզացված qPCR հատուկ բուֆեր և UNG/dUTP հակաաղտոտման համակարգ՝ արագ տաք մեկնարկի հասնելու համար՝ զգալիորեն բարելավելով qPCR ռեակցիաների արդյունավետությունն ու զգայունությունը:Այն կարող է ստանալ լավ ստանդարտ կորեր քանակական տարածքների լայն շրջանակում և ճշգրիտ կատարել քանակականությունը՝ արդյունավետորեն կանխելով կեղծ դրական ուժեղացումը, որը առաջանում է մնացորդային PCR արտադրանքի կամ աերոզոլային աղտոտման հետևանքով:Այս ռեագենտը համատեղելի է լյումինեսցենտային քանակական PCR գործիքների մեծ մասի հետ, ինչպիսիք են Applied Biosystems-ը, Eppendorf-ը, Bio-Rad-ը և Roche-ը և այլն, և լավ կայունություն է ցուցաբերում լիոֆիլացված ձևով:
Ռեագենտի կազմը
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+անվճար) (DG)
2. 250 մՄ MgCl2
3. 4×լիոպաշտպանիչ (ըստ ցանկության)
Պահպանման պայմանները
Երկարատև պահեստավորում -20℃;կարելի է պահել 4℃ ջերմաստիճանում մինչև 3 ամիս։Օգտագործելուց առաջ լավ խառնել ևխուսափել կրկնվող սառեցումից և հալվելուց:
Հեծանվավազքի արձանագրություն
| Ընթացակարգը | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլ |
| Մարսողություն | 50℃ | 2 րոպե | 1 |
| Պոլիմերազի ակտիվացում | 95℃ | 1~5 րոպե | 1 |
| Դենատուրա | 95℃ | 10-20 վրկ | 40-50 թթ |
| Եռացում և ընդլայնում | 56~64℃ | 20-60 վրկ | 40-50 թթ |
qPCR Liquid Reaction Syցողունի պատրաստում
|
Կազմը |
25 մկլ Ծավալ |
50µL Ծավալ |
Վերջնական համակենտրոնացում |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Մգ2+անվճար) (DG) | 5 մկլ | 10 մկլ | 1× |
| 250 մմ MgCl2 | 0,45 մկլ | 0,9 մկլ | 4,5 մմ |
| 4×լիոպաշտպանիչ1 | 6,25 մկլ | 12,5 մկլ | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1 մկլ | 2 մկլ | 1× |
| Կաղապար ԴՆԹ3 | —— | —— | —— |
| դդՀ2O | Մինչև 25 մկլ | Մինչև 50 մկլ | —— |
1. Պրայմերների համար 0.2 μM վերջնական կոնցենտրացիան սովորաբար լավ արդյունքներ է տալիս.երբ ռեակցիայի արդյունավետությունը վատ է, անհրաժեշտության դեպքում կարգավորեք այբբենարանի կոնցենտրացիան 0,2-1 մկՄ միջակայքում:Զոնդի կոնցենտրացիան սովորաբար օպտիմիզացվում է 0,1-0,3 մկմ միջակայքում՝ գրադիենտ փորձերի միջոցով՝ օպտիմալ համակցություններ գտնելու համար:
2. Տարբեր տեսակի կաղապարներում պարունակվող թիրախային գեների պատճենների թիվը տարբեր է.անհրաժեշտության դեպքում, կարող է կատարվել գրադիենտ նոսրացում՝ կաղապարի ավելացման օպտիմալ քանակությունը որոշելու համար:
3. Այս համակարգը կարող է լիոֆիլիզացվել;երբ հաճախորդներն օգտագործում են այս համակարգը առանց սառեցման-չորացման պահանջների, կարող է ընտրովի ավելացվել 4×լիոպաշտպանիչ; եթե պահանջվում են սառեցված արտադրանքներ, հեղուկ ռեակտիվների փուլում արտադրանքի կատարողականի վավերացման ժամանակ, այն պետք է ավելացնի 4×լիոպաշտպանիչ՝ լիոֆիլացված համակարգի բաղադրիչներին համապատասխանություն ապահովելու համար։ և էֆեկտներ։
Երբ համակարգը օգտագործվում էդ սառեցման համար պատրաստեք համակարգ as հետևյալը.
| Կազմը | 25µL Ռեակցիայի համակարգ |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+անվճար) (DG) | 5 մկլ |
| 250 մմ MgCl2 | 0,45 մկլ |
| 4×լիոպաշտպանիչ | 6,25 մկլ |
| 25×Primer-Probe Mix | 1 մկլ |
| դդՀ2O | Մինչև 18-20 մկլ |
* Եթե սառեցման-չորացման այլ համակարգերի կարիք կա, խնդրում ենք խորհրդակցել առանձին:
Լյոֆիլիզացիայի գործընթացss
| Ընթացակարգը | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Վիճակ | Ճնշում |
| Նախնական սառեցում | 4℃ | 30 րոպե | Պահել |
1 ատմ |
| -50℃ | 60 րոպե | Սառեցում | ||
| -50℃ | 180 րոպե | Պահել | ||
| Առաջնային չորացում | -30℃ | 60 րոպե | Ջեռուցում |
Ultimate Vacuum |
| -30℃ | 70 րոպե | Պահել | ||
| Երկրորդական չորացում | 25℃ | 60 րոպե | Ջեռուցում |
Ultimate Vacuum |
| 25℃ | 300 րոպե | Պահել |
2. Վերոնշյալ լիոֆիլացման գործընթացը միայն հղման համար է:Արտադրանքի տարբեր տեսակներ և տարբեր սառեցրած չորանոցներ ունեն տարբեր պարամետրեր, ուստի ճշգրտումները կարող են կատարվել ըստ փաստացիպայմանները օգտագործման ընթացքում.
3. Տարբեր լիոֆիլացման գործընթացները կարող են հարմար լինել լիոֆիլացված խմբաքանակի տարբեր չափերի համարարտադրանք, ուստի բավականաչափ փորձարկման վավերացում պետք է իրականացվի, երբ օգտագործվում է լայնածավալ արտադրության համար:
Լիոֆիլիզացիայի օգտագործման ցուցումներդ փոշի
1. Համառոտ ցենտրիֆուգեք լիոֆիլացված փոշին;
2. Ավելացրեք նուկլեինաթթվի ձևանմուշը լիոֆիլացված փոշու մեջ և ավելացրեք ջուր մինչև 25µL;
3. Լավ խառնել ցենտրիֆուգման միջոցով և գործարկել մեքենայի վրա:
Որակի հսկողություն:
1. Ֆունկցիոնալ փորձարկում՝ qPCR-ի զգայունություն, սպեցիֆիկություն, վերարտադրելիություն:
2. Չկա էկզոգեն նուկլեազային ակտիվություն, չկա էկզոգեն էնդո/էկզոնուկլեազային աղտոտում:
Տեխնիկական տեղեկատվություն:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG-ն օգտագործում է նոր տաք մեկնարկային ֆերմենտ, որը թույլ է տալիս արագ տաք մեկնարկը 1~5 րոպեի ընթացքում;հատուկ բուֆերային ձևակերպման միջոցով այն հարմար է մուլտիպլեքս ֆլուորեսցենտային քանակական PCR ռեակցիաների համար:
2. Այն ունի ավելի բարձր յուրահատկություն, ինչը զգալիորեն բարելավում է ֆլյուորեսցենտային քանակական PCR սահմանաչափի հայտնաբերման զգայունությունը, ուժեղացման կորերի նորմալացում, ֆլյուորեսցենտային արժեքն ակնհայտ բարելավում է ստանում ցածր կոնցենտրացիայի կաղապարներում, որոնք հարմար են որպես բարձր զգայունության ֆլուորեսցենտային քանակական PCR հայտնաբերման ռեակտիվներ:
3. Եռացման ավելի ցածր ջերմաստիճանով կամ 200 bp-ից ավելի երկարությամբ բեկորների համար առաջարկվում է 3 քայլ մեթոդ:
4. dUTP-ի օգտագործման արդյունավետությունը և UNG ֆերմենտի նկատմամբ զգայունությունը տարբեր թիրախային գեների համար տարբեր են, հետևաբար, եթե UNG համակարգի օգտագործումը հանգեցնում է հայտնաբերման զգայունության նվազմանը, ռեակցիայի համակարգը պետք է ճշգրտվի և օպտիմալացվի:Եթե տեխնիկական աջակցություն է պահանջվում, խնդրում ենք կապվել մեր ընկերության հետ:
5. Օգտագործեք հատուկ տարածքներ և պիպետներ ուժեղացումից առաջ և հետո, շահագործման ընթացքում կրեք ձեռնոցներ և հաճախակի փոխեք դրանք;Մի բացեք ռեակցիայի խողովակը ՊՇՌ-ի ավարտից հետո՝ նվազագույնի հասցնելու համար նմուշների աղտոտումը ՊՇՌ արտադրանքներով:
