Մկնիկի գենոտիպավորման հավաքածու

Կատուի համարը՝ HCR2021A

Այս արտադրանքը մի հավաքածու է, որը նախատեսված է մկների գենոտիպերի արագ նույնականացման համար, ներառյալ ԴՆԹ-ի հումքի արդյունահանումը և PCR ուժեղացման համակարգը:Արտադրանքը կարող է օգտագործվել PCR ուժեղացման համար անմիջապես մկան պոչից, ականջից, ոտքի մատից և այլ հյուսվածքներից՝ Lysis Buffer-ով և Proteinase k-ով պարզ կտրվածքից հետո:Ոչ մի գիշերվա մարսողություն, ֆենոլ-քլորոֆորմի արդյունահանում կամ սյունակի մաքրում, ինչը պարզ է և կրճատում է փորձերի ժամանակատար ժամանակը:Արտադրանքը հարմար է թիրախային բեկորների ամպլիֆիկացման համար մինչև 2 կբ և մուլտիպլեքս PCR ռեակցիաների համար մինչև 3 զույգ պրայմերներով:2×Mouse Tissue Direct PCR Mix-ը պարունակում է գենետիկորեն մշակված ԴՆԹ պոլիմերազ, Mg²⁺, dNTP-ներ և օպտիմիզացված բուֆերային համակարգ՝ ուժեղացման բարձր արդյունավետություն և արգելակիչի հանդուրժողականություն ապահովելու համար, այնպես որ PCR ռեակցիաները կարող են իրականացվել՝ ավելացնելով ձևանմուշներ և պրայմերներ և վերահիդրադրելով արտադրանքը մինչև 1×:Այս արտադրանքով ուժեղացված PCR արտադրանքն ունի ընդգծված «A» հիմք 3' ծայրում և կարող է օգտագործվել ուղղակիորեն TA կլոնավորման համար մաքրումից հետո:

Բաղադրիչներ

Պահպանման պայմանները

Ապրանքները պետք է պահվեն -25~-15℃ ջերմաստիճանում 2 տարի:Հալվելուց հետո Lysis Buffer-ը կարելի է պահել 2~8℃ ջերմաստիճանում կարճաժամկետ բազմակի օգտագործման համար և օգտագործելիս լավ խառնել:

Դիմում

Այս ապրանքը հարմար է մկան նոկաուտի վերլուծության, տրանսգենների հայտնաբերման, գենոտիպավորման և այլնի համար:

Հատկություններ

1.Պարզ գործողություն. կարիք չկա գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման;

2.Լայն կիրառություն. հարմար է մկնիկի տարբեր հյուսվածքների ուղղակի ուժեղացման համար:

Հրահանգներ

1.Գենոմային ԴՆԹ-ի ազատում

1) լիզատի պատրաստում

Հյուսվածքների լիզատը պատրաստվում է ըստ լուծվող մկների նմուշների քանակի (հյուսվածքի լիզատը պետք է պատրաստվի տեղում՝ ըստ դեղաչափի և մանրակրկիտ խառնվի օգտագործման համար), և մեկ նմուշի համար պահանջվող ռեակտիվների համամասնությունը հետևյալն է.

2) Նմուշի պատրաստում և լիզիս

Առաջարկվող հյուսվածքի օգտագործումը

Վերցրեք համապատասխան քանակությամբ մկան հյուսվածքի նմուշներ մաքուր ցենտրիֆուգային խողովակներում, ավելացրեք 200 մկլ թարմ հյուսվածքի լիզատ յուրաքանչյուր ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ, պտտեք և թափահարեք, այնուհետև ինկուբացրեք 55℃ ջերմաստիճանում 30 րոպե, այնուհետև տաքացրեք 98℃ 3 րոպե:

3) ցենտրիֆուգացիա

Լիզատը լավ թափահարեք և ցենտրիֆուգեք 12000 ռ/րոպե արագությամբ 5 րոպե:Սուպերնատանտը կարող է օգտագործվել որպես ձևանմուշ PCR ուժեղացման համար:Եթե ​​ձևանմուշն անհրաժեշտ է պահեստավորման համար, ապա վերին նյութը տեղափոխեք մեկ այլ ստերիլ ցենտրիֆուգային խողովակ և պահեք -20℃ ջերմաստիճանում 2 շաբաթ:

2.PCR ուժեղացում

Հեռացրեք 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix-ը -20℃-ից և հալեցրեք սառույցի վրա, խառնեք գլխիվայր և պատրաստեք PCR ռեակցիայի համակարգը հետևյալ աղյուսակի համաձայն (գործեք սառույցի վրա).

Նշում:

ա) Ավելացված գումարը չպետք է գերազանցի համակարգի 1/10-ը, և եթե շատ ավելացվի, PCR ուժեղացումը կարող է արգելակվել:

Առաջարկվող PCR պայմաններ

Նշում:

ա) Հալման ջերմաստիճան. հղվելով այբբենարանի Tm արժեքին, խորհուրդ է տրվում եռացման ջերմաստիճանը դնել այբբենարանի ավելի փոքր Tm արժեքի վրա +3~5℃:

Ընդհանուր խնդիրներ և լուծումներ

1.Ոչ նպատակային շերտեր

1) ավելորդ լիզի արտադրանք.Ընտրեք կաղապարի ամենահարմար քանակությունը, սովորաբար ոչ ավելի, քան համակարգի 1/10-ը;

2) Չափազանց մեծ նմուշի չափ:Լիզատը նոսրացրեք 10 անգամ, այնուհետև ուժեղացրեք, կամ փոքրացրեք նմուշի չափը և նորից լուծեք.

3) Հյուսվածքների նմուշները թարմ չեն.Խորհուրդ է տրվում օգտագործել թարմ հյուսվածքների նմուշներ;

4) այբբենարանի վատ որակ:Օգտագործեք գենոմային ԴՆԹ ամպլիֆիկացիայի համար՝ ստուգելու այբբենարանի որակը և օպտիմալացնելու այբբենարանի ձևավորումը:

2.Ոչ հատուկ ուժեղացում

1) Հալման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է, իսկ ցիկլի թիվը չափազանց բարձր է:Բարձրացնել եռացման ջերմաստիճանը և նվազեցնել ցիկլերի քանակը;

2) Կաղապարի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է:Կրճատել կաղապարի քանակը կամ նոսրացնել կաղապարը 10 անգամ ուժեղացումից հետո;

3) Վատ այբբենարանի առանձնահատկությունը.Օպտիմալացնել այբբենարանի դիզայնը:

Նշումներ

1.Նմուշների միջև խաչաձեւ աղտոտումից խուսափելու համար պետք է պատրաստել մի քանի նմուշառման գործիքներ, և յուրաքանչյուր նմուշառումից հետո գործիքների մակերեսը կարող է մաքրվել նատրիումի հիպոքլորիտի 2% լուծույթով կամ նուկլեինաթթվի մաքրող միջոցով, եթե կրկնակի օգտագործումը պահանջվում է:

2.Խորհուրդ է տրվում օգտագործել մկնիկի թարմ հյուսվածքներ, իսկ նմուշառման ծավալը չպետք է չափազանց մեծ լինի՝ ուժեղացման արդյունքների վրա ազդելու համար:

3.Լիզիս բուֆերը պետք է խուսափի հաճախակի սառեցումից-հալոցքից և կարող է պահվել 2~8℃ ջերմաստիճանում կարճաժամկետ բազմակի օգտագործման համար:Ցածր ջերմաստիճանում պահելու դեպքում կարող են տեղումներ առաջանալ, և դրանք օգտագործելուց առաջ պետք է ամբողջությամբ լուծարվեն:

4.PCR Mix-ը պետք է խուսափի հաճախակի սառեցումից-հալեցումից և կարող է պահվել 4℃ ջերմաստիճանում՝ կարճաժամկետ կրկնակի օգտագործման համար:

5.Այս արտադրանքը նախատեսված է միայն գիտափորձարարական հետազոտության համար և չպետք է օգտագործվի կլինիկական ախտորոշման կամ բուժման մեջ: