Վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ արդյունահանման հավաքածու
Այս փաթեթը հարմար է բարձր մաքրության վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ-ի արագ արդյունահանման համար այնպիսի նմուշներից, ինչպիսիք են քիթ-կոկորդային շվաբրերը, շրջակա միջավայրի շվաբրերը, բջիջների կուլտուրայի վերին նյութերը և հյուսվածքների միատարր գերնույն նյութերը:Հավաքածուն հիմնված է սիլիցիումի մեմբրանի մաքրման տեխնոլոգիայի վրա, որը վերացնում է ֆենոլ/քլորոֆորմ օրգանական լուծիչների կամ ժամանակատար ալկոհոլային տեղումների օգտագործման անհրաժեշտությունը՝ բարձր որակի վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ արդյունահանման համար:Ստացված նուկլեինաթթուները զերծ են կեղտից և պատրաստ են օգտագործման համար ներքևում գտնվող փորձերում, ինչպիսիք են հակադարձ տրանսկրիպցիան, PCR, RT-PCR, իրական ժամանակում PCR, հաջորդ սերնդի հաջորդականությունը (NGS) և Հյուսիսային բլոտը:
Պահպանման պայմանները
Պահել 15 ~ 25℃ ջերմաստիճանում և տեղափոխել սենյակային ջերմաստիճանում
Բաղադրիչներ
| Բաղադրիչներ | 100 RXNS |
| Բուֆեր VL | 50 մլ |
| Բուֆեր RW | 120 մլ |
| ՌՆազազերծ ddH2 O | 6 մլ |
| FastPure RNA սյունակներ | 100 |
| Հավաքածուի խողովակներ (2 մլ) | 100 |
| RNase առանց հավաքածուի խողովակներ (1 .5 մլ) | 100 |
Բուֆեր VL:Ապահովել միջավայր լիզիսի և կապելու համար:
Բուֆերային RW:Հեռացրեք մնացորդային սպիտակուցները և այլ կեղտերը:
ՌՆազազերծ ddH2O:Սպինի սյունակի թաղանթից մաքրեք ԴՆԹ/ՌՆԹ:
FastPure RNA սյունակներ.Հատուկ կլանել ԴՆԹ/ՌՆԹ:
Հավաքածուի խողովակներ 2 մլ:Հավաքեք ֆիլտրատը:
RNase-free Collection Tubes 1.5 մլ:Հավաքեք ԴՆԹ/ՌՆԹ:
Դիմումներ
Նազոֆարինգային շվաբրեր, շրջակա միջավայրի շվաբրեր, բջիջների կուլտուրայի սուպերնատանտներ և հյուսվածքների համասեռ գերնպատակներ:
Ինքնապատրաստ Մատերիալս
RNase առանց պիպետտի ծայրեր, 1,5 մլ RNase առանց ցենտրիֆուգի խողովակներ, ցենտրիֆուգ, պտտվող խառնիչ և պիպետներ:
Փորձի գործընթաց
Կատարեք բոլոր հետևյալ քայլերը կենսաանվտանգության կաբինետում:
1. Նմուշից 200 մկլ ավելացրեք RNase-ից զերծ ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ (անբավարար նմուշի դեպքում լրացրեք PBS կամ 0,9% NaCl), ավելացրեք 500 մկլ Buffer VL, լավ խառնեք պտտեցնելով 15-30 վրկ և ցենտրիֆուգեք: համառոտ հավաքել խառնուրդը խողովակի ստորին մասում:
2. Տեղադրեք FastPure RNA սյունակները հավաքածուի խողովակների մեջ 2 մլ:Խառնուրդը 1-ին քայլից տեղափոխեք FastPure RNA սյունակներ, ցենտրիֆուգեք 12,000 պտ/րոպե արագությամբ (13,400 × գ) 1 րոպե, և թափեք ֆիլտրատը:
3. FastPure RNA սյունակներում ավելացրեք 600 մկլ բուֆեր RW, ցենտրիֆուգեք 12,000 ռ/րոպե արագությամբ (13,400 × գ) 30 վայրկյան, և թափեք ֆիլտրատը:
4. Կրկնել 3-րդ քայլը:
5. Ցենտրիֆուգեք դատարկ սյունը 12000 պտ/րոպե արագությամբ (13400 × գ) 2 րոպե:
6. Զգուշորեն տեղափոխեք FastPure RNA սյունակները 1,5 մլ նոր RNase-ազատ հավաքածուի խողովակի մեջ (տրամադրված է փաթեթում) և ավելացրեք 30 – 50 մկլ RNase առանց ddH2O մեմբրանի կենտրոն՝ առանց սյունակին դիպչելու:Թողեք 1 րոպե կանգնի սենյակային ջերմաստիճանում և ցենտրիֆուգեք 12000 պտ/րոպե (13400 × գ) 1 րոպե:
7. Հեռացրեք FastPure RNA սյունակները:ԴՆԹ/ՌՆԹ-ն կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել հետագա անալիզների համար կամ պահվել -30~ -15°C-ում կարճ ժամանակահատվածում կամ -85~-65°C-ում ավելի երկար ժամանակով:
Նշումներ
Միայն հետազոտական օգտագործման համար:Չի օգտագործվում ախտորոշիչ ընթացակարգերում:
1. Նմուշները նախօրոք հավասարեցրեք սենյակային ջերմաստիճանին:
2. Վիրուսները խիստ վարակիչ են։Խնդրում ենք համոզվել, որ փորձարկումից առաջ ձեռնարկված են անվտանգության բոլոր անհրաժեշտ նախազգուշական միջոցները:
3. Խուսափեք նմուշի կրկնակի սառեցումից և հալեցումից, քանի որ դա կարող է հանգեցնել արդյունահանված վիրուսային ԴՆԹ/ՌՆԹ-ի քայքայման կամ նվազման:
4. Ինքնուրույն պատրաստված սարքավորումը ներառում է առանց RNase-ի պիպետտի ծայրեր, 1,5 մլ RNase-ից զերծ ցենտրիֆուգային խողովակներ, ցենտրիֆուգ, պտտվող խառնիչ և պիպետներ:
5. Կոմպլեկտն օգտագործելիս կրեք լաբորատոր վերարկու, մեկանգամյա օգտագործման լատեքսային ձեռնոցներ և մեկանգամյա օգտագործման դիմակ և օգտագործեք RNase-ից զերծ սպառվող նյութեր՝ RNase-ով վարակվելու վտանգը նվազագույնի հասցնելու համար:
6. Կատարեք բոլոր քայլերը սենյակային ջերմաստիճանում, եթե այլ բան նշված չէ:
Մեխանիզմ և աշխատանքային հոսք
