Hotstart Taq ԴՆԹ պոլիմերազա
Hot Start Taq ԴՆԹ պոլիմերազը (հակամարմինների ձևափոխում) ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազ է Thermus aquaticus YT-1-ից, որն օժտված է 5'→3' պոլիմերազային ակտիվությամբ և 5' տատանվող էնդոնուկլեազային ակտիվությամբ:Տաք սկիզբ Taq ԴՆԹ պոլիմերազը Taq ԴՆԹ պոլիմերազ է, որը փոփոխվում է ջերմակայուն Taq հակամարմիններով:Հակամարմինների փոփոխումը մեծացրել է PCR-ի առանձնահատկությունը, զգայունությունը և եկամտաբերությունը:
Բաղադրիչներ
| Բաղադրիչ | HC1012 Ա-01 | HC1012 Ա-02 | HC1012 Ա-03 | HC1012 Ա-04 |
| 5×HC Taq բուֆեր | 4×1 մլ | 4×10 մլ | 4×50 մլ | 5×400 մլ |
| Hot Start Taq ԴՆԹ պոլիմերազա (փոփոխված հակամարմին) (5 U/μL) | 0.1 մլ | 1 մլ | 5 մլ | 10×5 մլ |
Դիմումներ
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 ժամը 25℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 և 50% գլիցերին:
Պահպանման պայման
Տեղափոխումը մինչև 0°C և պահվում է -25°C~-15°C ջերմաստիճանում:
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի այն քանակությունը, որը 30 րոպեում 75°C ջերմաստիճանում 15 նմոլ dNTP է պարունակում թթու չլուծվող նյութի մեջ:
Որակի հսկողություն
1.Endonuclease Գործունեություն:20 U ֆերմենտի 4 մկգ pUC19 ԴՆԹ-ի ինկուբացիա 4 ժամվա ընթացքում 37℃ ջերմաստիճանում հանգեցրել է ԴՆԹ-ի ոչ հայտնաբերվող քայքայման, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
2.5 կբ Lambda PCR:5 նգ Lambda ԴՆԹ-ի PCR ուժեղացման 25 ցիկլեր 1,25 միավոր Taq ԴՆԹ պոլիմերազով 200 μM dNTP-ների և 0,2 մկՄ պրայմերների առկայության դեպքում ստացվում է ակնկալվող 5 կբ արդյունք:
3.Էկզոնուկլեազի ակտիվություն:Նվազագույնը 12,5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազա պարունակող 50 մկլ ռեակցիայի ինկուբացիա 10 նմոլ 5´-FAM օլիգոնուկլեոտիդով 30 րոպե 37℃ ջերմաստիճանում թույլ չի տալիս հայտնաբերել դեգրադացիա:
4.RNase գործունեությունը:20 U ֆերմենտ պարունակող 10 µL ռեակցիայի ինկուբացիան 2 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում 1 մկգ ՌՆԹ տրանսկրիպտներով հանգեցրել է ՌՆԹ-ի ոչ հայտնաբերվող քայքայման, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
5.Ջերմային անակտիվացում.Ոչ
Ռեակցիայի համակարգ
| Բաղադրիչներ | Ծավալը |
| Կաղապար ԴՆԹa | ընտրովի |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 մլ |
| 10 մկմ հակադարձ այբբենարան | 0,5 մլ |
| dNTP խառնուրդ (յուրաքանչյուրը 10 մմ) | 0,5 մլ |
| 5×HC Taq բուֆեր | 5 մլ |
| Taq ԴՆԹ պոլիմերազբ(5U/μL) | 0,125 մլ |
| Միջուկազերծ ջուր | Մինչև 25 մլ |
Նշումներ:
1) ա.
| ԴՆԹ | Գումարը |
| Գենոմիկ | 1 նգ-1 մկգ |
| Պլազմիդ կամ վիրուսային | 1 pg-1 նգ |
2) բ.Taq DNA Polymerase-ի օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է տատանվել 5-50 միավոր/մլ (0,1-0,5 միավոր/25 µL ռեակցիա) մասնագիտացված ծրագրերում:
Ջերմային ցիկլի արձանագրություն
ՊՇՌ
| Քայլ | Ջերմաստիճանը(°C) | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| Նախնական դենատուրացիաa | 95 ℃ | 1-3 րոպե | - |
| Դենատուրացիա | 95 ℃ | 15-30 վ | 30-35 ցիկլեր |
| Հալեցումբ | 45-68 ℃ | 15-60-ական թթ | |
| Ընդլայնումը | 68 ℃ | 1կբ/րոպե | |
| Վերջնական ընդլայնում | 68 ℃ | 5 րոպե | - |
Նշումներ:
1) 95°C-ում 1 րոպեի սկզբնական դենատուրացիա բավարար է ուժեղացումների մեծ մասի համար:Դժվար ձևանմուշների համար խորհուրդ է տրվում 95°C ջերմաստիճանում 2-3 րոպե ավելի երկար դենատորացիա:Գաղութների ՊՇՌ-ով խորհուրդ է տրվում նախնական 5 րոպե դենատուրացիա 95°C ջերմաստիճանում:
2) Հալման քայլը սովորաբար 15-60 վրկ է:Հալման ջերմաստիճանը հիմնված է այբբենարանի զույգի Tm-ի վրա և սովորաբար 45-68℃ է:
