Bst 2.0 ԴՆԹ պոլիմերազ (առանց գլիցերինի)
Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2-ը ստացվում է Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I-ից, որն ունի 5'→3' ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվություն և ուժեղ շղթայի փոխարինող ակտիվություն, բայց չունի 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:Bst DNA Polymerase V2-ը իդեալականորեն հարմար է շղթայի տեղաշարժի, իզոթերմային ուժեղացման LAMP-ի (Loop միջնորդավորված իզոթերմային ուժեղացման) և արագ հաջորդականացման համար:
Բաղադրիչներ
| Բաղադրիչ | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA պոլիմերազ V2 (առանց գլիցերինի) (8U/μL) | 0,2 մլ | 1 մլ | 10 մլ |
| 10×HC Bst V2 բուֆեր | 1,5 մլ | 2×1,5 մլ | 3×10 մլ |
| MgSO4(100 մմ) | 1,5 մլ | 2×1,5 մլ | 2×10 մլ |
Դիմումներ
1.LAMP իզոթերմային ուժեղացում
2.ԴՆԹ շղթայի մեկ տեղաշարժի ռեակցիա
3. Բարձր GC գեների հաջորդականություն
4. Նանոգրամ մակարդակի ԴՆԹ հաջորդականություն:
Պահպանման պայման
Տեղափոխումը մինչև 0°C և պահվում է -25°C~-15°C ջերմաստիճանում:
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակություն, որը 30 րոպեում 65°C-ում 25 նմոլ dNTP է պարունակում թթու չլուծվող նյութի մեջ:
Որակի հսկողություն
1.Սպիտակուցի մաքրության վերլուծություն (SDS-PAGE):Bst DNA պոլիմերազ V2-ի մաքրությունը ≥99% է որոշվում SDS-PAGE վերլուծությամբ՝ օգտագործելով Coomassie Blue հայտնաբերումը:
2.Էկզոնուկլեազի ակտիվություն:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիան, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst DNA պոլիմերազ V2 1 μg λ-Hind Ⅲ մարսող ԴՆԹ-ի հետ 16 ժամ 37 ℃ ջերմաստիճանում, չի հանգեցնում հայտնաբերման դեգրադացիայի, ինչպես որոշվել է:
3.Nickase Activity:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիա, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst DNA պոլիմերազ V2 1 μg pBR322 ԴՆԹ-ի հետ 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:
4.RNase գործունեությունը:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիան, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2 1,6 μg MS2 ՌՆԹ-ով 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:
5.E. coli ԴՆԹ:120 U Bst DNA պոլիմերազ V2-ը զննվում է E. coli գենոմային ԴՆԹ-ի առկայության համար՝ օգտագործելով TaqMan qPCR E. coli 16S rRNA տեղանքի համար հատուկ պրայմերներով:E. coli-ի գենոմային ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը ≤1 պատճեն է:
Լամպի ռեակցիա
| Բաղադրիչներ | 25μL |
| 10×HC Bst V2 բուֆեր | 2,5 մլ |
| MgSO4 (100 մմ) | 1,5 մլ |
| dNTP (յուրաքանչյուրը 10 մմ) | 3,5 մլ |
| SYTO™ 16 Կանաչ (25×)a | 1,0 մլ |
| Այբբենարանի խառնուրդb | 6 մլ |
| Bst DNA պոլիմերազ V2 (առանց գլիցերինի) (8 U/uL) | 1 մլ |
| Կաղապար | × μL |
| ddH2O | Մինչև 25 մլ |
Նշումներ:
1) ա.SYTOTM 16 Կանաչ (25×). Ըստ փորձարարական կարիքների, այլ ներկանյութեր կարող են օգտագործվել որպես փոխարինիչներ.
2) բ.Նախաներկի խառնուրդ. ստացվում է 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2.5 µM F3, 2.5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB և այլ ծավալներ խառնելով:
Ռեակցիան և վիճակը
1 × HC Bst V2 բուֆեր, ինկուբացիոն ջերմաստիճանը 60°C-ից 65°C է:
Ջերմային անակտիվացում
80 °C, 20 րոպե
