Ունիվերսալ SYBR GREEN qPCR Premix (կապույտ)
Կատուի համարը՝ HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (ներկի վրա հիմնված) նախնական լուծում է 2×իրական ժամանակում քանակական PCR ուժեղացման համար, որը բնութագրվում է բարձր զգայունությամբ և յուրահատկությամբ, ունի կապույտ գույն և ունի նմուշի ավելացման հետագծման ազդեցություն:Հիմնական բաղադրիչը Taq ԴՆԹ պոլիմերազը օգտագործում է հակամարմինների տաք մեկնարկը` արդյունավետորեն արգելակելու ոչ սպեցիֆիկ ամպլիֆիկացիան նմուշի պատրաստման ընթացքում այբբենարանի եռացման պատճառով:Միևնույն ժամանակ, բանաձևը ավելացնում է խթանող գործոններ՝ PCR ռեակցիայի ուժեղացման արդյունավետությունը բարելավելու և GC տարբեր պարունակություններով գեների (30 ~ 70%) ամպլիֆիկացմանը հավասարեցնելու համար, որպեսզի քանակական PCR-ն կարողանա լավ գծային հարաբերություններ ստանալ լայն քանակական առումով: շրջան։Այս արտադրանքը պարունակում է հատուկ ROX Passive Reference ներկ, որը կիրառելի է qPCR գործիքների մեծ մասի համար:Անհրաժեշտ չէ կարգավորել ROX-ի կոնցենտրացիան տարբեր գործիքների վրա:Միայն անհրաժեշտ է ավելացնել պրայմերներ և կաղապարներ՝ ռեակցիայի համակարգը ուժեղացման համար պատրաստելու համար:
Բաղադրիչներ
Universal Blue qPCR Master Mix
Պահպանման պայմանները
Ապրանքը առաքվում է սառույցի տուփերով և կարող է պահպանվել -25℃~-15℃ ջերմաստիճանում 18 ամիս:Ռեակցիոն համակարգը պահելիս կամ պատրաստելիս անհրաժեշտ է խուսափել ուժեղ լույսի ճառագայթումից:
Հստակեցում
| Համակենտրոնացում | 2× |
| Հայտնաբերման մեթոդ | SYBR |
| PCR մեթոդ | qPCR |
| Պոլիմերազ | Taq ԴՆԹ պոլիմերազ |
| Նմուշի տեսակը | ԴՆԹ |
| Կիրառական սարքավորումներ | qPCR գործիքների մեծ մասը |
| Ապրանքի տեսակը | SYBR պրեմիքս իրական ժամանակի ֆլուորեսցենտային քանակական PCR-ի համար |
| Դիմել (դիմում) | Գենի արտահայտություն |
Հրահանգներ
1.Ռեակցիոն համակարգ
| Բաղադրիչներ | Ծավալ (μL) | Ծավալ (μL) | Վերջնական համակենտրոնացում |
| Ունիվերսալ SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10 μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 մկմոլ/լ |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 մկմոլ/լ |
| ԴՆԹ | X | X | |
| դդՀ2O | մինչև 50 | մինչև 20 | - |
[Ծանոթագրություն]. Օգտագործելուց առաջ մանրակրկիտ խառնեք՝ ուժեղ ցնցումից ավելորդ փուչիկներից խուսափելու համար:
ա) Այբբենարանի կոնցենտրացիան. այբբենարանի վերջնական կոնցենտրացիան 0,2 μmol/L է և կարող է նաև ճշգրտվել 0,1-ից 1,0 μmol/L, ըստ անհրաժեշտության:
բ) Կաղապարի կոնցենտրացիան. Եթե ձևանմուշը cDNA-ի չնոսրացված լուծույթ է, ապա օգտագործվող ծավալը չպետք է գերազանցի qPCR ռեակցիայի ընդհանուր ծավալի 1/10-ը:
գ) Կաղապարի նոսրացում. խորհուրդ է տրվում նոսրացնել cDNA-ի պաշարային լուծույթը 5-10 անգամ:Կաղապարի ավելացված օպտիմալ քանակությունը ավելի լավ է, երբ ուժեղացման արդյունքում ստացված Ct արժեքը 20-30 ցիկլ է:
դ) Ռեակցիայի համակարգ. խորհուրդ է տրվում օգտագործել 20μL կամ 50μL՝ ապահովելու թիրախային գենի ուժեղացման արդյունավետությունն ու կրկնելիությունը:
ե) Համակարգի պատրաստում. խնդրում ենք պատրաստվել գերմաքուր նստարանին և օգտագործել ծայրերը և ռեակցիոն խողովակները՝ առանց նուկլեազի մնացորդի;խորհուրդ է տրվում օգտագործել ֆիլտրային փամփուշտներով խորհուրդները:Խուսափեք խաչաձեւ աղտոտումից և աերոզոլային աղտոտումից:
2.Ռեակցիայի ծրագիր
Ստանդարտ ծրագիր
| Ցիկլային քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| Նախնական դենատուրացիա | 95℃ | 2 րոպե | 1 |
| Դենատուրացիա | 95℃ | 10 վրկ | 40 |
| Կառուցում/ընդլայնում | 60℃ | 30 վայրկյան★ | |
| Հալման կորի փուլ | Գործիքների լռելյայն | 1 | |
Արագ ծրագիր
| Ցիկլային քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| Նախնական դենատուրացիա | 95℃ | 30 վրկ | 1 |
| Դենատուրացիա | 95℃ | 3 վրկ | 40 |
| Կառուցում/ընդլայնում | 60℃ | 20 վայրկյան★ | |
| Հալման կորի փուլ | Գործիքների լռելյայն | 1 | |
[Նշում]. Արագ ծրագիրը հարմար է գեների ճնշող մեծամասնության համար, և ստանդարտ ծրագրերը կարող են փորձարկվել առանձին բարդ երկրորդական կառուցվածքի գեների համար:
ա) Հալման ջերմաստիճանը և ժամանակը. Խնդրում ենք հարմարեցնել ըստ այբբենարանի և թիրախային գենի երկարության:
բ) Լյումինեսցենտային ազդանշանի ընդունում (★). Խնդրում ենք սահմանել փորձարարական ընթացակարգը՝ համաձայն գործիքի օգտագործման հրահանգների պահանջների:
գ) Հալման կոր. գործիքի լռելյայն ծրագիրը կարող է օգտագործվել սովորաբար:
3. Արդյունքների վերլուծություն
Քանակական փորձերի համար պահանջվում էր առնվազն երեք կենսաբանական կրկնօրինակում:Ռեակցիայից հետո ուժեղացման կորը և հալման կորը պետք է հաստատվեն:
3.1 Ուժեղացման կորը.
Ստանդարտ ուժեղացման կորը S-աձև է:Քանակական վերլուծությունն առավել ճշգրիտ է, երբ Ct-ի արժեքը ընկնում է 20-ից 30-ի միջև: Եթե Ct-ի արժեքը 10-ից փոքր է, ապա անհրաժեշտ է նոսրացնել ձևանմուշը և նորից կատարել թեստը:Երբ Ct-ի արժեքը 30-35-ի միջև է, անհրաժեշտ է մեծացնել կաղապարի կոնցենտրացիան կամ ռեակցիայի համակարգի ծավալը, որպեսզի բարելավվի ուժեղացման արդյունավետությունը և ապահովվի արդյունքների վերլուծության ճշգրտությունը:Երբ Ct-ի արժեքը 35-ից մեծ է, թեստի արդյունքները չեն կարող քանակապես վերլուծել գենի էքսպրեսիան, բայց կարող են օգտագործվել որակական վերլուծության համար:
3.2 Հալման կորը.
Հալման կորի մեկ գագաթնակետը ցույց է տալիս, որ ռեակցիայի առանձնահատկությունը լավ է և կարող է կատարվել քանակական վերլուծություն.եթե հալման կորը ցույց է տալիս կրկնակի կամ բազմակի գագաթներ, քանակական վերլուծություն չի կարող իրականացվել:Հալման կորը ցույց է տալիս կրկնակի գագաթներ, և անհրաժեշտ է դատել, թե արդյոք ոչ նպատակային գագաթնակետը պրայմերային դիմեր է, թե ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում ԴՆԹ ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզով:Եթե դա այբբենարանի դիմեր է, ապա խորհուրդ է տրվում նվազեցնել այբբենարանի կոնցենտրացիան կամ վերանախագծել պրայմերները՝ ուժեղացման բարձր արդյունավետությամբ:Եթե դա ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում է, խնդրում ենք բարձրացնել եռացման ջերմաստիճանը կամ վերանախագծել այբբենարանները յուրահատկությամբ:
Նշումներ
Խնդրում ենք կրել անհրաժեշտ PPE, ինչպիսիք են լաբորատոր վերարկու և ձեռնոցներ՝ ձեր առողջությունն ու անվտանգությունն ապահովելու համար:
Այս ապրանքը ՄԻԱՅՆ հետազոտական օգտագործման համար է!
