Ուլտրա նուկլեազ
UltraNuclease-ը գենետիկորեն մշակված էնդոնուկլաեզ է՝ ստացված Serratia marcescens-ից, որն ունակ է քայքայել ԴՆԹ-ն կամ ՌՆԹ-ն՝ կրկնակի կամ միաշղթա, գծային կամ շրջանաձև՝ լայն տիրույթի պայմաններում, ամբողջությամբ քայքայել նուկլեինաթթուները 5'-մոնոֆոսֆատ երկարությամբ օլիգոնուկլեոտիդների: .Գենային ինժեներիայի ձևափոխումից հետո արտադրանքը խմորվեց, արտահայտվեց և զտվեց Escherichia coli-ով (E. coli), ինչը նվազեցնում է բջջի վերնաթաթի և բջիջների լիզատի գիտական հետազոտությունների մածուցիկությունը, բայց նաև բարելավում է սպիտակուցի մաքրման արդյունավետությունը և ֆունկցիոնալ հետազոտությունը:Այն կարող է օգտագործվել նաև գենային թերապիայի, վիրուսների մաքրման, պատվաստանյութերի արտադրության, սպիտակուցների և պոլիսախարիդների դեղագործական արդյունաբերության մեջ՝ որպես հյուրընկալող նուկլեինաթթվի մնացորդի հեռացման ռեակտիվ:
Ապրանքի Նկարագրություն
| CAS No. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Մոլեկուլային քաշը | 30 կԴա |
| Իզոէլեկտրական կետ | 6.85 |
| Սպիտակուցի մաքրություն | ≥99% (SDS-PAGE և SEC-HPLC) |
| Հատուկ գործունեություն | ≥1.1 × 106 U / մգ |
| Օպտիմալ ջերմաստիճան | 37°C |
| Օպտիմալ pH | 8.0 |
| Protease Activity | բացասական |
| Կենսաբեռ | ＜10CFU/100000 U |
| Մնացորդային հյուրընկալող բջջային սպիտակուց | ≤10 ppm |
| Ծանր մետաղ | ≤10 ppm |
| Բակտերիալ էնդոտոքսին | ＜0.25EU/1000U |
| Պահպանման բուֆեր | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% գլիցերին |
Պահպանման պայմանները
≤0°C փոխադրում；-25~-15°C Պահպանում, 2 տարվա վավերականություն (խուսափեք սառցակալումից-հալեցումից):
Միավորի սահմանում
Ֆերմենտի քանակությունը, որն օգտագործվում էր △A260-ի կլանման արժեքը 1,0-ով փոխելու համար 30 րոպեի ընթացքում 37 °C ջերմաստիճանում, pH 8,0, որը համարժեք է մարսված 37 մկգ սաղմոնի սերմի ԴՆԹ-ին օլիգոնուկլեոտիդների մեջ կտրելու միջոցով, սահմանվեց որպես ակտիվ միավոր (U):
Որակի հսկողություն
Մնացորդային հյուրընկալող բջջային սպիտակուցELISA հավաքածու
•Պրոթեզերոն Մնացորդներ250KU/mL UltraNuclease-ն արձագանքել է սուբստրատի հետ 60 րոպե, ակտիվություն չի հայտնաբերվել:
•Բակտերիալ էնդոտոքսինLAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic Volume 4 (2020 Edition) գելային սահմանաչափի փորձարկման մեթոդ:Ընդհանուր կանոններ (1143).
•Կենսաբեռ: Չինաստանի Ժողովրդական Հանրապետության Դեղագիր Հատոր 4 (2020 Հրատարակություն) — Ընդհանուր
Անպտղության թեստի կանոններ (1101), ՉԺՀ ազգային ստանդարտ, GB 4789.2-2016:
•Ծանր մետաղ:ICP-AES, HJ776-2015.
Գործողություն
UltraNuclease-ի ակտիվությունը զգալիորեն արգելակվել է, երբ SDS-ի կոնցենտրացիան գերազանցել է 0.1%-ը կամ EDTA-ն:
կոնցենտրացիան ավելի քան 1մՄ էր: Սուրֆակտանտ Triton X-100, Tween 20 և Tween 80-ը ոչ մի ազդեցություն չեն ունեցել նուկլեազի վրա
հատկությունները, երբ կոնցենտրացիան 1,5%-ից ցածր էր:
| Գործողություն | Օպտիմալ շահագործում | Վավեր գործողություն |
| Ջերմաստիճանը | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 մմ | 1-15 մմ |
| DTT | 0-100 մմ | > 100 մմ |
| 2-Մերկապտոէթանոլ | 0-100 մմ | > 100 մմ |
| Միավալենտ մետաղական իոն (Na+, K+ և այլն) | 0-20 մմ | 0-200 մմ |
| PO43- | 0-10 մմ | 0-100 մմ |
Օգտագործումը և դեղաչափը
• Պատվաստանյութերի արտադրանքից հեռացնել էկզոգեն նուկլեինաթթուն, նվազեցնել նուկլեինաթթվի մնացորդային թունավորության ռիսկը և բարելավել արտադրանքի անվտանգությունը:
• Կրճատել կերային հեղուկի մածուցիկությունը, որն առաջանում է նուկլեինաթթվից, կրճատել մշակման ժամանակը և բարձրացնել սպիտակուցի ստացումը:
• Հեռացրեք նուկլեինաթթուն, որը փաթաթված մասնիկն է (վիրուս, ներդիր և այլն), որը նպաստավոր է
մասնիկի ազատման և մաքրման համար:
| Փորձարարական տեսակ | Սպիտակուցների արտադրություն | Վիրուս, պատվաստանյութ | Բջջային դեղեր |
| Բջիջների համարը | 1 գ բջջային թաց քաշ (վերակասեցված է 10 մլ բուֆերով) | 1լ խմորում հեղուկ գերբնակիչ | 1 լ մշակույթ |
| Նվազագույն դեղաքանակ | 250U | 100U | 100U |
| Առաջարկվող դեղաքանակ | 2500 U | 25000 U | 5000 U |
• Նուկլեազային մշակումը կարող է բարելավել նմուշի լուծումը և վերականգնումը սյունակային քրոմատոգրաֆիայի, էլեկտրոֆորեզի և բլոտային վերլուծության համար:
• Գենային թերապիայի ժամանակ նուկլեինաթթուն հեռացնում են մաքրված ադենո-կապակցված վիրուսներ ստանալու համար:
