Ջերմաստիճանի զգայուն UNG
Ջերմաստիճանի զգայուն UNG-ը (TS-UNG) ստացվում է E. coli-ում ռեկոմբինանտ արտահայտությամբ:Ֆերմենտը կատալիզացնում է ազատ ուրացիլի արտազատումը ուրացիլ պարունակող մեկ և երկշղթա ԴՆԹ-ից և անգործուն է ՌՆԹ-ի նկատմամբ:Համեմատելով E. coli գենի ծագման սովորական UNG ֆերմենտի հետ, TS-UNG ֆերմենտը ավելի բարձր ակտիվություն ունի ցածր ջերմաստիճաններում (20℃~37℃) և ջերմաստիճանի զգայուն է և հեշտությամբ ապաակտիվացվում է (50℃), խուսափելով dUTP պարունակող ուժեղացման քայքայումից: արտադրանքը սենյակային ջերմաստիճանում մնացորդային ակտիվությամբ, որը կարող է մնալ սովորական UNG ֆերմենտի անակտիվացումից հետո:Հետևաբար, TS-UNG ֆերմենտը ոչ միայն հարմար է PCR աղտոտման կանխարգելման ռեակցիայի համար, այլև լավ համընկնում է RT-PCR ուժեղացման ծրագրի հետ և կարող է օգտագործվել RT-PCR աղտոտման կանխարգելման ռեակցիայի մեջ:
Առաջարկվող հայտ
Աղտոտման կանխարգելման ուժեղացում
Պահպանման պայման
-20°C երկարատև պահպանման համար, օգտագործելուց առաջ պետք է լավ խառնել, խուսափել հաճախակի սառցակալումից:
Պահպանման բուֆեր
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol:
Միավորի սահմանում
Ֆերմենտի քանակությունը, որն անհրաժեշտ է dU հիմքեր պարունակող 1 մկգ միաշղթա ԴՆԹ-ի քայքայման համար 1 ժամում 37°C ջերմաստիճանում կազմում է ակտիվության 1 միավոր (U):
Որակի հսկողություն
1.SDS-PAGE էլեկտրոֆորետիկ մաքրություն ավելի քան 98%
2.Քայքայման ակտիվություն, խմբաքանակից սերիա հսկողություն, կայունություն
3.Չկա էկզոգեն նուկլեազային ակտիվություն, չկա էկզոգեն էնդոնուկլեազ կամ էկզոնուկլեազային աղտոտում:
Հրահանգներ
| Բաղադրիչներ | Ծավալը (μL) | Վերջնական կոնցենտրացիան |
| 10 × PCR բուֆեր (dNTP ազատ, Mg²+անվճար) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 մկմ |
| dUTP (փոխարինել dTTP) | - | 200-600 մկմ |
| 25 մՄ MgCl2 | 2-8 մլ | 1-4 մմ |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mixա | 2 | 1× |
| Կաղապար | - | ＜1 μg/ռեակցիա |
| ddH2O | Մինչև 50 | - |
Նշում. a. Եթե օգտագործվում է qPCR/qRT-PCR-ի համար, ապա լյումինեսցենտային զոնդը պետք է ավելացվի ռեակցիայի համակարգում:Սովորաբար, 0,2 մկմ պրիմերի վերջնական կոնցենտրացիան կարող է լավ արդյունքներ տալ;երբ ռեակցիայի արդյունավետությունը վատ է, այբբենարանի կոնցենտրացիան կարող է ճշգրտվել 0,2-1 մկմ միջակայքում:Սովորաբար, զոնդի կոնցենտրացիան օպտիմիզացված է 0,1-0,3 մկմ միջակայքում:Համակենտրոնացման գրադիենտ փորձեր կարող են իրականացվել՝ գտնելու այբբենարանի և զոնդի լավագույն համադրությունը:
Նշումներ
1.TS-UNG ֆերմենտի արձագանքման օպտիմալ ջերմաստիճանը համեմատաբար ցածր է, և այն կարող է օպտիմիզացվել 20℃~37℃ միջակայքում, ֆերմենտի դեղաչափը և ռեակցիայի ժամանակը կարող են օպտիմիզացվել 0,1~0,5 U, 5~ միջակայքում: 10 րոպե;իսկ ֆերմենտը կարող է ապաակտիվացվել հակադարձ տրանսկրիպցիայի գործընթացում:
2.Այն հարմար է PCR-ի և RT-PCR-ի համար՝ կանխելու աղտոտումը:
3.Խուսափեք հաճախակի սառցակալումից և մի ենթարկվեք ջերմաստիճանի մեծ տատանումների:
4.Ամրապնդվող տարբեր գեները ունեն dUTP-ի օգտագործման տարբեր արդյունավետություն և զգայունություն UNG ֆերմենտի նկատմամբ, հետևաբար, եթե UNG համակարգի օգտագործումը հանգեցնում է հայտնաբերման զգայունության նվազմանը, ռեակցիայի համակարգը պետք է կարգավորվի և օպտիմիզացվի, եթե տեխնիկական աջակցության կարիք ունեք, խնդրում ենք դիմել: մեր Ընկերությունը.
