Wild Taq ԴՆԹ պոլիմերազ
Taq ԴՆԹ պոլիմերազը ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազ է Thermus aquaticus YT-1-ից, որն օժտված է 5'→3' պոլիմերազային ակտիվությամբ և 5' տատանվող էնդոնուկլեազային ակտիվությամբ:
Բաղադրիչներ
| Բաղադրիչ | HC1010 Ա-01 | HC1010 Ա-02 | HC1010 Ա-03 | HC1010 Ա-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 մլ | 2×10 մլ | 2×50 մլ | 5×200 մլ |
| Taq ԴՆԹ պոլիմերազ (5 U/μL) | 0.1 մլ | 1 մլ | 5 մլ | 5×10 մլ |
Պահպանման պայման
Տեղափոխումը մինչև 0°C և պահվում է -25°C~-15°C ջերմաստիճանում:
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի այն քանակությունը, որը 30 րոպեում 75°C ջերմաստիճանում 15 նմոլ dNTP է պարունակում թթու չլուծվող նյութի մեջ:
Որակի հսկողություն
1.Սպիտակուցի մաքրության վերլուծություն (SDS-PAGE):Taq ԴՆԹ պոլիմերազի մաքրությունը ≥95% որոշվել է SDS-PAGE անալիզի միջոցով:
2.Endonuclease Գործունեություն:Առնվազն 5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազը 1 μg λDNA-ով 16 ժամվա ընթացքում 37 ℃ ջերմաստիճանում չի հանգեցնում հայտնաբերման դեգրադացիայի, ինչպես որոշվել է:
3.Էկզոնուկլեազի ակտիվություն:Առնվազն 5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազի 1 μg λ-Hind Ⅲ ԴՆԹ-ի մարսողությունը 16 ժամվա ընթացքում 37 ℃ ջերմաստիճանում չի հանգեցնում հայտնաբերման դեգրադացիայի, ինչպես որոշվել է:
4.Nickase Activity:Առնվազն 5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազի 1 մկգ pBR322 ԴՆԹ-ի 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանի դեպքում չի հայտնաբերվում դեգրադացիա, ինչպես որոշվել է:
5.RNase գործունեությունը:Առնվազն 5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազի 1,6 մկգ MS2 ՌՆԹ-ով 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:
6.E. coliԴՆԹ:5 U Taq ԴՆԹ պոլիմերազը զննվում է E. coli-ի գենոմային ԴՆԹ-ի առկայության համար՝ օգտագործելով TaqMan qPCR E. coli 16S rRNA տեղանքի համար հատուկ պրայմերներով:E. coli-ի գենոմային ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը ≤1 պատճեն է:
7.PCR ուժեղացում (5.0 կբ Լամբդա ԴՆԹ)- 50 µL ռեակցիան, որը պարունակում է 5 նգ Լամբդա ԴՆԹ 5 միավոր Taq ԴՆԹ պոլիմերազի հետ PCR ուժեղացման 25 ցիկլերի համար, հանգեցնում է ակնկալվող 5,0 կբ արտադրանքի:
Ռեակցիայի կարգավորում
| Բաղադրիչներ | Ծավալը |
| Կաղապար ԴՆԹa | ընտրովի |
| 10 μM Forward Primer | 1 մլ |
| 10 մկմ հակադարձ այբբենարան | 1 մլ |
| dNTP խառնուրդ (յուրաքանչյուրը 10 մմ) | 1 մլ |
| 10×Taq բուֆեր | 5 մլ |
| Taq ԴՆԹ պոլիմերազբ | 0,25 մլ |
| Միջուկազերծ ջուր | Մինչև 50 մլ |
Նշումներ:
1) Տարբեր կաղապարների արձագանքման օպտիմալ կոնցենտրացիան տարբեր է:Հետևյալ աղյուսակը ցույց է տալիս 50 µL ռեակցիոն համակարգի առաջարկվող կաղապարի օգտագործումը:
| ԴՆԹ | Գումարը |
| Գենոմիկ | 1 նգ-1 մկգ |
| Պլազմիդ կամ վիրուսային | 1 pg-1 նգ |
2) Taq DNA Polymerase-ի օպտիմալ կոնցենտրացիան կարող է տատանվել 0,25 µL~1 µL-ից մասնագիտացված ծրագրերում:
ԱրձագանքԾրագիր
| Քայլ | Ջերմաստիճանը(°C) | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| Նախնական դենատուրացիաa | 95 ℃ | 5 րոպե | - |
| Դենատուրացիա | 95 ℃ | 15-30 վ | 30-35 ցիկլեր |
| Հալեցումբ | 60 ℃ | 15 վ | |
| Ընդլայնումը | 72 ℃ | 1կբ/րոպե | |
| Վերջնական ընդլայնում | 72 ℃ | 5 րոպե | - |
Նշումներ:
1) Դենատուրացիայի սկզբնական պայմանը հարմար է ուժեղացման ռեակցիաների մեծ մասի համար և կարող է փոփոխվել՝ ըստ կաղապարի կառուցվածքի բարդության:Եթե ձևանմուշի կառուցվածքը բարդ է, ապա նախադենատուրացիայի ժամանակը կարող է երկարացվել մինչև 5-10 րոպե՝ սկզբնական դենատուրացիայի էֆեկտը բարելավելու համար:
2) Հալման ջերմաստիճանը պետք է ճշգրտվի ըստ այբբենարանի Tm արժեքի, որը սովորաբար սահմանվում է 3~5 ℃ ցածր, քան այբբենարանի Tm արժեքը.Բարդ ձևանմուշների համար անհրաժեշտ է կարգավորել եռացման ջերմաստիճանը և երկարացնել երկարացման ժամանակը արդյունավետ ուժեղացման հասնելու համար:
