Rnase inhibitor (առանց գլիցերինի)
Մկների RNase ինհիբիտորը մկների RNase-ի ռեկոմբինանտ է, որը արտահայտված և մաքրված է E.coli-ից:Այն կապվում է RNase A, B կամ C-ի հետ 1:1 հարաբերակցությամբ ոչ կովալենտային կապի միջոցով՝ դրանով իսկ արգելելով երեք ֆերմենտների ակտիվությունը և պաշտպանելով ՌՆԹ-ն քայքայումից:Այնուամենայնիվ, Այն արդյունավետ չէ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H կամ RNase-ի դեմ Aspergillus-ից:Մկների RNase ինհիբիտորը փորձարկվել է RT-PCR, RT-qPCR և IVT mRNA-ով և համատեղելի է տարբեր առևտրային հակադարձ տրանսկրիպտազների, ԴՆԹ պոլիմերազների և ՌՆԹ պոլիմերազների հետ:
Համեմատած մարդկային RNase ինհիբիտորների հետ, մկների RNase ինհիբիտորը չի պարունակում երկու ցիստեին, որոնք խիստ զգայուն են օքսիդացման նկատմամբ, որն առաջացնում է արգելակիչի անակտիվացում:Դա այն դարձնում է կայուն DTT-ի ցածր կոնցենտրացիաների դեպքում (1 մՄ-ից պակաս):Այս հատկությունը դարձնում է այն պիտանի օգտագործման համար այն ռեակցիաներում, որտեղ DTT-ի բարձր կոնցենտրացիաները բացասաբար են ազդում ռեակցիայի վրա (օրինակ՝ իրական ժամանակում RT-PCR):
Aդիմում
Այս արտադրանքը կարող է լայնորեն օգտագործվել ցանկացած փորձի ժամանակ, որտեղ RNase-ի միջամտությունը հնարավոր է ՌՆԹ-ի քայքայումից խուսափելու համար, օրինակ՝
1. Առաջին շղթայի cDNA սինթեզ, RT-PCR, RT-qPCR և այլն;
2. Պաշտպանել ՌՆԹ-ն դեգրադացիայից in-vitro տրանսկրիպցիայի/թարգմանության ժամանակ (օրինակ՝ վիրուսի վերարտադրությունը in vitro);
3. RNase-ի ակտիվության արգելակում ՌՆԹ-ի մեկուսացման և մաքրման ժամանակ:
Պահպանման պայմանները
Պահել -25-15℃;
Սառեցման-հալման ցիկլեր ≤ 5 անգամ;
Գործում է 1 տարի։
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես RNase Inhibitor-ի քանակություն, որն անհրաժեշտ է 5 նգ RNase A-ի ակտիվությունը 50%-ով արգելակելու համար:
Մոլեկուլային քաշը
RNase Inhibitor (առանց գլիցերինի) 50 կԴա սպիտակուց է:
Որակի հսկողություն
Էկզոնուկլեազ Գործունեություն:
40 U ֆերմենտի ինկուբացիա 1 μg λ-Hind III մարսող ԴՆԹ-ով 16 ժամ 37°C-ում հանգեցրել է ԴՆԹ-ի ոչ հայտնաբերվող քայքայման, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
Էնդոնուկլեազի ակտիվություն.
40 U ֆերմենտի ինկուբացիա 1 μg λ ԴՆԹ-ով 16 ժամվա ընթացքում 37°C-ում հանգեցրել է ԴՆԹ-ի ոչ հայտնաբերվող քայքայման, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
Նիկինգ Գործունեություն:
40 U ֆերմենտի ինկուբացիա 1 մկգ pBR322-ով 16 ժամվա ընթացքում 37℃ ջերմաստիճանում հանգեցրել է ԴՆԹ-ի հայտնաբերման ոչ մի դեգրադացիայի, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
RNase Գործունեություն:
40 U ֆերմենտի ինկուբացիա 1,6 μg MS2 ՌՆԹ-ով 4 ժամվա ընթացքում 37℃ ջերմաստիճանում հանգեցրել է ՌՆԹ-ի ոչ հայտնաբերվող քայքայման, ինչպես որոշվել է գելային էլեկտրոֆորեզով:
E.coli ԴՆԹ:
40 U ֆերմենտը հայտնաբերվում է TaqMan qPCR-ով:E.coli ԴՆԹ-ն ≤ 0. 1pg/40U է:
Nօտեs
1. Մի թափահարեք կամ ուժգին խառնեք՝ կանխելու ֆերմենտի անակտիվացումը:
2.RNase inhibitor-ը ակտիվ է 25℃-ից մինչև 55℃ ջերմաստիճաններում և ապաակտիվացված է ≥65℃ ջերմաստիճանում:
3. RNase H, RNase 1 և RNase T1-ի ակտիվությունը չի արգելակվում:
4. RNase-ի ակտիվությունը արգելակելու pH-ի միջակայքը լայն է (ակտիվ pH 5-9-ում), առավելագույն ակտիվություն ցուցաբերելով pH 7-8-ում:
