M-MLV հակադարձ տրանսկրիպտազ
RevScript Հակադարձ տրանսկրիպտազը ստացվում է գենետիկական տեխնոլոգիայի միջոցով:Այն ունի cDNA-ի սինթեզի ավելի բարձր ունակություն, ջերմային կայունություն և ռեակցիայի ջերմաստիճանի սահմանաչափ (մինչև 60°C):Սինթեզված cDNA արտադրանքը մինչև 10 կբ է:Այն մեծացնում է կաղապարների մերձեցումը և հարմար է բարդ երկրորդական կառուցվածքով կամ ցածր պատճենող գեներով ՌՆԹ կաղապարների հակադարձ տառադարձման համար:
Բաղադրիչներ
| Բաղադրիչ | HC2003 Բ (10,000 U) | HC2003 Բ (5*10000U) | HC2003 Բ (200,000 U) |
| RevScript հակադարձ տրանսկրիպտազա (200U/μL) | 50 մլ | 5×50 մլ | 1 մլ |
| 5 × RevScript բուֆեր | 250 մլ | 1,25 մլ | 5 մլ |
Պահպանման պայման
Այս ապրանքը պետք է պահվի -25°C~-15°C ջերմաստիճանում 2 տարի:
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը ներառում է 1 նմոլ dTTP թթուով չլուծվող նյութի մեջ 10 րոպեում 37°C ջերմաստիճանում՝ օգտագործելով Oligo(dT) որպես պրայմերներ:
Ռեակցիայի կարգավորում
1.ՌՆԹ-ի ձևանմուշի դենատուրացիա (Այս քայլը կամընտիր է, ՌՆԹ-ի կաղապարի ապանատուրացիան օգնում է բացել երկրորդական կառուցվածքները, ինչը կբարելավի առաջին շղթայի cDNA-ի ելքը:)
| Բաղադրիչներ | Ծավալը (μL) |
| RNase ազատ ddH2O | Դեպի 13 |
| Օլիգո (dT)18 (50 մկմոլ/լ) կամ պատահական այբբենարան (50 մկմոլ/լ) Կամ գենային հատուկ այբբենարաններ (2 մկմոլ/լ) | 1 |
| կամ 1 | |
| կամ 1 | |
| ՌՆԹ կաղապար | X a |
Նշումներ:
1) ա՝ ընդհանուր ՌՆԹ՝ 1-5 մգ կամ mRNA՝ 1-500 նգ
2) Ինկուբացնել 65°C-ում 5 րոպե, այնուհետև անմիջապես տեղափոխել սառույցի վրա, որպեսզի սառչի 2 րոպե:Համառոտ ցենտրիֆուգում` ռեակցիայի հեղուկ հավաքելու համար, ավելացրեք հակադարձ տրանսկրիպցիոն ռեակցիայի լուծույթը, ինչպես ցույց է տրված հետևյալ աղյուսակում:Նրբորեն պիպետտացրեք խառնելու համար:
1.Ռեակցիոն խառնուրդի պատրաստում (20 μL ծավալ)
| Բաղադրիչներ | Ծավալը (μL) |
| Նախորդ քայլի խառնուրդ | 13 |
| 5×Բուֆեր | 4 |
| dNTP խառնուրդ (10 նմոլ/լ) | 1 |
| Հակադարձ տրանսկրիպտազ (200 U/μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 |
1.Կատարեք ռեակցիան հետևյալ պայմաններում.
| Ջերմաստիճանը (°C) | Ժամանակը |
| 25 °Ca | 5 րոպե |
| 42 °Cb | 15-30 րոպե |
| 85 °Cc | 5 րոպե |
Նշումներ:
1) ա.Ինկուբացիա 25°C-ում 5 րոպե տեւողությամբ պահանջվում է միայն պատահական հեքսամերների օգտագործման համար:Խնդրում ենք բաց թողնել այս քայլը, երբ օգտագործում եք Oligo (dT)18կամ Gene Specific Primer:
2) բ.Հակադարձ արտագրման առաջարկվող ջերմաստիճանը 42°C է: Բարդ երկրորդական կառուցվածքներով կամ GC-ի բարձր պարունակությամբ կաղապարների համար առաջարկվում է ռեակցիայի ջերմաստիճանը բարձրացնել մինչև 50-55°C:
3) գ.Տաքացնելով 85°C-ում 5 րոպե՝ հակադարձ տրանսկրիպտազը ապաակտիվացնելու համար:
4) Ապրանքը կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել PCR կամ qPCR ռեակցիաներում կամ պահվել -20°C-ում՝ կարճաժամկետ պահպանման համար:Երկարատև պահպանման համար խորհուրդ է տրվում եռացնել արտադրանքը և պահել -80°C ջերմաստիճանում:Խուսափեք հաճախակի սառցակալումից:
5) Ապրանքը հարմար է մեկ քայլով RT-qPCR-ի համար, խորհուրդ է տրվում ավելացնել 10-20 U հակադարձ տրանսկրիպտազ յուրաքանչյուր 25 μL ռեակցիայի համակարգի համար կամ աստիճանաբար ավելացնել հակադարձ տրանսկրիպտազի քանակը՝ ըստ փաստացի իրավիճակի:
Նշումներ
1.Խնդրում ենք մաքուր պահել փորձնական տարածքը.Գործողության ընթացքում պետք է կրել մաքուր ձեռնոցներ և դիմակներ:Փորձարկման մեջ օգտագործվող բոլոր սպառվող նյութերը պետք է չունեն RNase-ից՝ RNase-ով աղտոտվածությունը կանխելու համար:
2.Բոլոր պրոցեդուրաները պետք է կատարվեն սառույցի վրա՝ կանխելու ՌՆԹ-ի քայքայումը:
3.Հակադարձ արտագրման բարձր արդյունավետությունն ապահովելու համար առաջարկվում են բարձրորակ ՌՆԹ նմուշներ:
4.Այս ապրանքը նախատեսված է միայն հետազոտական օգտագործման համար:
5.Խնդրում ենք գործել լաբորատոր բաճկոններով և միանգամյա օգտագործման ձեռնոցներով՝ ձեր անվտանգության համար:
