DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
Կատուի համարը՝ HC4007A
DNase I-ը (Դեզօքսիռիբոնուկլեազ I) էնդոդեօքսիռիբոնուկլեազ է, որը կարող է մարսել մեկ կամ երկշղթա ԴՆԹ:Այն ճանաչում և ճեղքում է ֆոսֆոդիստերային կապերը՝ արտադրելու մոնոդեօքսինուկլեոտիդներ կամ միակողմանի կամ երկշղթա օլիգոդեօքսինուկլեոտիդներ՝ 5'-տերմինալում ֆոսֆատային խմբերով և 3'-տերմինալում՝ հիդրոքսիլով:DNase I-ի ակտիվությունը կախված է Ca-ից2+և կարող է ակտիվանալ երկվալենտ մետաղական իոնների միջոցով, ինչպիսիք են Mn-ը2+և Zn2+.5 մմ Ca2+պաշտպանում է ֆերմենտը հիդրոլիզից:Մգ-ի ներկայությամբ2+, ֆերմենտը կարող էր պատահականորեն ճանաչել և կտրել ԴՆԹ-ի ցանկացած շղթայի ցանկացած տեղ:Ներկայությամբ Մն2+, ԴՆԹ-ի կրկնակի շղթաները կարող են միաժամանակ ճանաչվել և ճեղքվել գրեթե նույն տեղում՝ ձևավորելով հարթ ծայրի ԴՆԹ-ի բեկորներ կամ կպչուն վերջավոր ԴՆԹ բեկորներ՝ 1-2 նուկլեոտիդներով դուրս ցցված:
Բաղադրիչներ
| Անուն | 0.1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase առանց | 20 մլ | 200 մլ | 1մլ | 10 մլ |
| 10×DNase I բուֆեր | 1մլ | 1մլ | 5 × 1 մլ | 5 × 10 մլ |
Պահպանման պայմանները
-25℃~-15℃ պահեստավորման համար;Տեղափոխում սառցե տոպրակների տակ:
Հրահանգներ
1. Պատրաստեք ռեակցիայի լուծույթը RNase-ից զերծ խողովակի մեջ՝ ըստ ստորև թվարկված համամասնությունների.
| Բաղադրիչ | Ծավալը |
| ՌՆԹ | X μg |
| 10 × DNase I բուֆեր | 1 մլ |
| DNase I, RNase առանց (5U/μL) | 1 U մեկ μg RNA① |
| դդՀ2O | Մինչև 10 մկլ |
Նշում. ①Հաշվե՛ք DNase I-ի ծավալը, որը պետք է ավելացվի՝ ելնելով ՌՆԹ-ի քանակից:
2. 37 ℃ 15 րոպե;
3. Ավելացնել 0.5M EDTA 2.5mM~5mM վերջնական կոնցենտրացիան և տաքացնել 65℃ 10 րոպե՝ ռեակցիան դադարեցնելու համար:Նմուշը կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել հաջորդ ռեակցիայի համար, ինչպիսին է հակադարձ տառադարձումըփորձ.
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի այն քանակությունը, որն ամբողջությամբ կքայքայի 1 մկգ pBR322-ը:ԴՆԹ 10 րոպեում 37℃.
Որակի հսկողություն
RNase:5 U DNase I-ը 1,6 մկգ MS2 ՌՆԹ-ով 4 ժամվա ընթացքում 37℃ ջերմաստիճանում չի քայքայվում, քանի որորոշվում է ագարոզայի գել էլեկտրոֆորեզով:
Նշումներ
1. Խնդրում ենք ինքներդ պատրաստել 0.5MEDTA:
2. Օգտագործեք 1U DNase I մեկ մկգ ՌՆԹ-ի համար:Այնուամենայնիվ, եթե ՌՆԹ-ն 1 մկգ-ից պակաս է, խնդրում ենք օգտագործել 1U DNase I:
3. Խնդրում ենք գործարկման ընթացքում ֆերմենտը սառույցի վրա դնել:
