BspQI
BspQI-ն կարող է ռեկոմբինանտ կերպով արտահայտվել E. coli-ում, որը կարող է ճանաչել հատուկ տեղամասեր և արտադրվում են տակ
BspQI, IIs սահմանափակող էնդոնուկլեազի սահմանափակման էնդոնուկլեազ, ստացվում է ռեկոմբինանտ E. coli շտամից, որը կրում է կլոնավորված և փոփոխված BspQI գենը Bacillus sphaericus-ից:Այն կարող է ճանաչել կոնկրետ տեղամասեր, իսկ ճանաչման հաջորդականությունը և ճեղքման վայրերը հետևյալն են.
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Ապրանքի Նկարագրություն
1. Բարձր ակտիվություն, արագ մարսողություն;
2. Ցածր աստղային ակտիվություն, ապահովելով ճշգրիտ կտրում, ինչպես «scalpel»;
3. Առանց BSA-ի և կենդանական ծագման:
Մեթիլացման զգայունություն
Dam methylation:Ոչ զգայուն;
Dսմ մեթիլացում:Ոչ զգայուն;
CpG մեթիլացում:Ոչ զգայուն;
Պահպանման պայմանները
Ապրանքը պետք է առաքվի ≤ 0℃;Պահել -25~- 15℃ վիճակում։
Պահպանման բուֆեր
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 μg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X-100 և 50% գլիցերին (pH 7.0 @ 25°C):
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակություն, որն անհրաժեշտ է 1 ժամվա ընթացքում 50°C ջերմաստիճանում 1 մկգ Ներքին հսկողության ԴՆԹ-ի մարսման համար՝ 50 մկլ ռեակցիայի ընդհանուր ծավալով:
Որակի հսկողություն
Սպիտակուցի մաքրության վերլուծություն (SDS-PAGE):BspQI-ի մաքրությունը ≥95% որոշվել է SDS-PAGE վերլուծությամբ:
RNase:10 U BspQI-ը 1,6 մկգ MS2 ՌՆԹ-ով 4 ժամվա ընթացքում 50℃ ջերմաստիճանում չի քայքայվում, ինչպես որոշվում է ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզով:
DNase-ի ոչ հատուկ գործունեություն.10 U BspQI 1 μg λ ԴՆԹ-ով 50℃ 16 ժամվա ընթացքում, համեմատած 50℃ 1 ժամվա ընթացքում, չի տալիս ավելցուկ ԴՆԹ, ինչպես որոշվում է ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզով:
Կապակցում և կտրում.1 μg λDNA 10U BspQI-ով մարսելուց հետո ԴՆԹ-ի բեկորները կարող են կապվել T4 ԴՆԹ լիգազի հետ 16ºC ջերմաստիճանում:Եվ այս կապակցված բեկորները կարող են կրկնվել BspQI-ով:
E. coli ԴՆԹ: E. coli 16s rDNA-ին հատուկ TaqMan qPCR հայտնաբերումը ցույց տվեց, որ E.coli գենոմի մնացորդը ≤ 0.1 pg/ul:
Հյուրընկալող սպիտակուցի մնացորդը.≤ 50 ppm
Բակտերիալ Էնդոտոքսին. LAL-թեստ, ըստ չինական Pharmacopoeia IV 2020 հրատարակության, գելի սահմանաչափի փորձարկման մեթոդ, ընդհանուր կանոն (1143):Բակտերիալ էնդոտոքսինի պարունակությունը պետք է լինի ≤10 ԵՄ/մգ:
Ռեակցիայի համակարգ և պայմաններ
| Բաղադրիչ | Ծավալը |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 մլ |
| ԴՆԹ | 1 մկգ |
| 10 x BspQ I բուֆեր | 5 մլ |
| dd H2O | Մինչև 50 մլ |
Ռեակցիայի պայմանները՝ 50℃, 1~ 16 ժ.
Ջերմային ապաակտիվացում՝ 80°C 20 րոպե:
Առաջարկվող ռեակցիայի համակարգը և պայմանները կարող են ապահովել ֆերմենտի մարսողության համեմատաբար լավ ազդեցություն, որը միայն հղման համար է, մանրամասների համար խնդրում ենք դիմել փորձարարական արդյունքներին:
Ապրանքի դիմում
Սահմանափակում էնդոնուկլեազի մարսողություն, Արագ կլոնավորում:
Նշումներ
1. Ֆերմենտի ծավալը ≤ ռեակցիայի ծավալի 1/10:
2. Աստղերի ակտիվությունը կարող է առաջանալ, երբ գլիցերինի կոնցենտրացիան 5%-ից ավելի է:
3. Ճեղքման ակտիվությունը կարող է առաջանալ, երբ Ենթաշերտը ցածր է առաջարկված հարաբերակցությունից:
