Ջերմ մեկնարկ Bst 2.0 ԴՆԹ պոլիմերազ (գլիցերին առանց)

Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2-ը ստացվում է Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I-ից, որն ունի 5'→3' ԴՆԹ պոլիմերազային ակտիվություն և ուժեղ շղթայի փոխարինող ակտիվություն, բայց չունի 5'→3' էկզոնուկլեազային ակտիվություն:Bst DNA Polymerase V2-ը իդեալականորեն հարմար է շղթայի տեղաշարժի, իզոթերմային ուժեղացման LAMP-ի (Loop միջնորդավորված իզոթերմային ուժեղացման) և արագ հաջորդականացման համար:Bst DNA պոլիմերազ V2-ը տաք մեկնարկային տարբերակ է, որը հիմնված է Bst DNA պոլիմերազի V2-ի (HC5005A) վրա, որը ստացվել է շրջելի մոդիֆիկացիայի տեխնոլոգիայով, որը կարող է արգելակել ԴՆԹ պոլիմերազի ակտիվությունը սենյակային ջերմաստիճանում, այնպես որ ռեակցիայի համակարգը կարող է գործել և ձևակերպվել սենյակային ջերմաստիճանում՝ կանխելու համար: - հատուկ ուժեղացում և բարելավել ռեակցիայի արդյունավետությունը, և այս տարբերակը կարող է լիոֆիլիզացվել:Բացի այդ, նրա ակտիվությունն ազատվում է բարձր ջերմաստիճանում, ուստի առանձին ակտիվացման քայլի կարիք չկա։

Բաղադրիչներ

Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2 (առանց գլիցերինի) (8U/μL)

Դիմումներ

1.LAMP իզոթերմային ուժեղացում

2.ԴՆԹ-ի շղթայի մեկ տեղաշարժի ռեակցիա

3.Բարձր GC գեների հաջորդականություն

4.Նանոգրամ մակարդակի ԴՆԹ-ի հաջորդականություն:

Պահպանման պայման

Տեղափոխումը մինչև 0°C և պահվում է -25°C~-15°C ջերմաստիճանում:

Միավորի սահմանում

Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակություն, որը 30 րոպեում 65°C-ում 25 նմոլ dNTP է պարունակում թթու չլուծվող նյութի մեջ:

Որակի հսկողություն

1.Սպիտակուցի մաքրության վերլուծություն (SDS-PAGE):Bst DNA պոլիմերազ V2-ի մաքրությունը ≥99% է որոշվում SDS-PAGE վերլուծությամբ՝ օգտագործելով Coomassie Blue հայտնաբերումը:

2.EդոնուկլեազԳործունեություն:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիա, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2 1 μg λDNA-ով 16 ժամվա ընթացքում 37 ℃ ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված ​​է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:

3.Էկզոնուկլեազի ակտիվություն:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիան, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst DNA պոլիմերազ V2 1 μg λ-Hind Ⅲ մարսող ԴՆԹ-ի հետ 16 ժամ 37 ℃ ջերմաստիճանում, չի հանգեցնում հայտնաբերման դեգրադացիայի, ինչպես որոշվել է:

4.Nickase Activity:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիա, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst DNA պոլիմերազ V2 1 μg pBR322 ԴՆԹ-ի հետ 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված ​​է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:

5.RNase գործունեությունը:50 μL ռեակցիայի ինկուբացիան, որը պարունակում է նվազագույնը 8 U Bst ԴՆԹ պոլիմերազ V2 1,6 μg MS2 ՌՆԹ-ով 16 ժամվա ընթացքում 37°C ջերմաստիճանում, ինչպես որոշված ​​է, չի հայտնաբերվում դեգրադացիա:

6.E. coliԴՆԹ:120 U Bst DNA պոլիմերազ V2-ը զննվում է E. coli գենոմային ԴՆԹ-ի առկայության համար՝ օգտագործելով TaqMan qPCR E. coli 16S rRNA տեղանքի համար հատուկ պրայմերներով:E. coli-ի գենոմային ԴՆԹ-ի աղտոտվածությունը ≤1 պատճեն է:

Լամպի ռեակցիա

Նշումներ:

1) ա.SYTOTM 16 Կանաչ (25×). Ըստ փորձարարական կարիքների, այլ ներկանյութեր կարող են օգտագործվել որպես փոխարինիչներ.

2) բ.Նախաներկի խառնուրդ. ստացվում է 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2.5 µM F3, 2.5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB և այլ ծավալներ խառնելով:

Ռեակցիան և վիճակը

1 × HC Bst V2 բուֆեր, ինկուբացիոն ջերմաստիճանը 60°C-ից 65°C է:

Ջերմային անակտիվացում

 80°C, 20 րոպե