UDG/UNG ֆերմենտներ
UDG (uracil DNA glycosylase) կարող է կատալիզացնել N-glycosidic կապի հիդրոլիզը ուրացիլային բազայի և շաքարաֆոսֆատային ողնաշարի միջև ssDNA-ում և dsDNA-ում:Այն կարող է հեշտությամբ վերահսկել աերոզոլային աղտոտումը և հարմար է սովորական մոլեկուլային կենսաբանական համակարգերի համար, ինչպիսիք են PCR, qPCR, RT-qPCR և LAMP:
Տեխնիկական պայմաններ
| Արտահայտման հյուրընկալող | Recombinant E. coli uracil DNA glycosylase գենի հետ |
| Մոլեկուլային քաշը | 24. 8կԴա |
| Մաքրություն | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Ջերմային անակտիվացում | 95℃, 5~10 րոպե |
| Միավորի սահմանում | Մեկ միավորը (U) սահմանվում է որպես ֆերմենտի այն քանակությունը, որն անհրաժեշտ է լ μg dU պարունակող dsDNA-ի հիդրոլիզը կատալիզացնելու համար 30 րոպեում 25℃ ջերմաստիճանում: |
Պահպանում
Ապրանքը պետք է պահվի 25℃~-15°C ջերմաստիճանում երկու տարի:
Հրահանգներ
1.PCR ռեակցիայի խառնուրդի պատրաստում հետևյալ համակարգի համաձայն
| Բաղադրիչներ | Ծավալը (μL) | Վերջնական կոնցենտրացիան |
| 10×PCR բուֆեր (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 մմոլ/LMgCl | 3 | 1,5 մմոլ/լ |
| dUTP (10 մմոլ/լ) | 3 | 0.6 մմոլ/լ |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10մմոլ/Լեցում) | 1 | 0.2 մմոլ/Լեցում |
| Կաղապար ԴՆԹ | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0.4 մկմոլ/լ |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0.4 մկմոլ/լ |
| Taq ԴՆԹ պոլիմերազ (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Մինչև 50 | - |
Նշում: Համաձայն փորձարարական պահանջների, dUTP-ի վերջնական կոնցենտրացիան կարող է ճշգրտվել 0,2-0,6 մմոլ/լ-ի միջև, իսկ 0,2 մմոլ/լ dTTP կարող է ընտրովի ավելացվել:
2.Ուժեղացման կարգը
| Ցիկլային քայլ | Ջերմաստիճանը | Ժամանակը | Ցիկլեր |
| dU պարունակող կաղապարի դեգրադացիա | 25℃ | 10 րոպե | 1 |
| UDG-ի ակտիվացում, կաղապարի սկզբնական դենատուրացիա | 95℃ | 5-10 րոպե | 1 |
| Դենատուրացիա | 95℃ | 10 վրկ |
30-35 թթ |
| Հալեցում | 60℃ | 20 վրկ | |
| Ընդլայնումը | 72℃ | 30 վրկ/կբ | |
| Վերջնական երկարաձգում | 72℃ | 5 րոպե | 1 |
Նշում: 25°C-ում արձագանքման ժամանակը կարող է ճշգրտվել 5-10 րոպեի ընթացքում՝ համաձայն փորձարարական պահանջների:
Նշումներ
1.UDG-ն ակտիվ է PCR ռեակցիայի բուֆերների մեծ մասում:
2.Օգտագործման դեպքում ֆերմենտները պետք է պահվեն սառցե տուփի մեջ կամ սառցե լոգանքի վրա և օգտագործելուց անմիջապես հետո պետք է պահվեն -20°C ջերմաստիճանում:
3.Խնդրում ենք կրել անհրաժեշտ PPE, նման լաբորատոր վերարկու և ձեռնոցներ՝ ձեր առողջությունն ու անվտանգությունն ապահովելու համար:
