Ալկալային ֆոսֆատազ (ALP)
Նկարագրություն
Ալկալային ֆոսֆատազը ստացվում է ռեկոմբինանտ E. coli շտամից, որը կրում է TAB5 գենը:Ֆերմենտը կատալիզացնում է ԴՆԹ և ՌՆԹ ֆոսֆոմոնոստերների 5' և 3' ծայրերի դեֆոսֆորիլացումը։Նաև հիդրոլիզացնում է ռիբոզը, ինչպես նաև դեզօքսիռիբոնուկլեոզիդ տրիֆոսֆատները (NTPs և dNTPs):TAB5 ալկալային ֆոսֆատազը գործում է 5' դուրս ցցված, 5' խորացած և բութ ծայրերի վրա:Ֆոսֆատազը կարող է օգտագործվել մոլեկուլային կենսաբանության բազմաթիվ ծրագրերում, ինչպիսիք են կլոնավորումը կամ զոնդերի վերջի պիտակավորումը՝ ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի ֆոսֆորիլացված ծայրերը հեռացնելու համար:Կլոնավորման փորձերի ժամանակ դեֆոսֆորիլացումը կանխում է գծայինացված պլազմիդային ԴՆԹ-ի ինքնակապակցումը:Այն կարող է նաև քայքայել չներառված dNTP-ները PCR ռեակցիաներում՝ ԴՆԹ-ի հաջորդականության համար ձևանմուշ պատրաստելու համար:Ֆերմենտը լիովին և անդառնալիորեն ապաակտիվացվում է՝ 5 րոպե տաքացնելով 70°C-ում, ինչի արդյունքում ֆոսֆատազի հեռացումը մինչև կապակցումը կամ վերջի պիտակավորումն անհարկի է դառնում:
Օգտագործումը
1. Ալկալային ֆոսֆատազը զուգակցված սպիտակուցների հետ (հակամարմիններ, streptavidin և այլն) կարող է հատուկ բացահայտել թիրախային մոլեկուլները և կարող է օգտագործվել ELISA, WB և հիստոքիմիական հայտնաբերման համար;
2. Ալկալային ֆոսֆատազը կարող է օգտագործվել ԴՆԹ-ի կամ ՌՆԹ-ի 5'-տերմինալը ապաֆոսֆորացնելու համար՝ ինքնակապը կանխելու համար;
3. Վերոնշյալ դեֆոսֆորիլացված ԴՆԹ-ն կամ ՌՆԹ-ն կարող են պիտակավորվել ռադիոպիտակավորված ֆոսֆատներով (T4 պոլինուկլեոտիդ կինազի միջոցով)
Քիմիական կառուցվածք
Հստակեցում
| Փորձարկման առարկաներ | Տեխնիկական պայմաններ |
| Ֆերմենտային ակտիվություն | 5 U/μL |
| Էնդոնուկլեազի ակտիվություն | Չի հայտնաբերվել |
| Էկզոնուկլեազի ակտիվություն | Չի հայտնաբերվել |
| Nicking գործունեությունը | Չի հայտնաբերվել |
| RNase գործունեությունը | Չի հայտնաբերվել |
| E.coli ԴՆԹ | ≤1պատճեն/5U |
| Էնդոտոքսին | LAL-Թեստ, ≤10EU/mg |
| Մաքրություն | ≥95% |
Փոխադրում և պահեստավորում
Տրանսպորտ:Շրջակա միջավայր
Պահպանում:Պահել 2-8°C ջերմաստիճանում
Առաջարկվում է կրկնակի փորձարկումԿյանք.2 տարի
