M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase

Neoscript հակադարձ տրանսկրիպտազը հակադարձ տրանսկրիպտազ է, որը ստացվում է E.coli-ում Moloney մկների լեյկոզ վիրուսի ծագման և արտահայտման M-MLV գենի մուտացիոն սքրինինգի միջոցով:Ֆերմենտը հեռացնում է RNase H-ի ակտիվությունը, ունի ավելի բարձր ջերմաստիճանի հանդուրժողականություն և հարմար է բարձր ջերմաստիճանի հակադարձ արտագրման համար:Հետևաբար, այն օգտակար է ՌՆԹ-ի բարձր մակարդակի կառուցվածքի և ոչ սպեցիֆիկ գործոնների անբարենպաստ ազդեցությունները cDNA-ի սինթեզի վրա վերացնելու համար և ունի ավելի բարձր կայունություն և հակադարձ տառադարձման սինթեզի ունակություն:Ֆերմենտն ունի ավելի բարձր կայունություն և հակադարձ տառադարձման սինթեզի ունակություն:

Բաղադրիչներ

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

2.5 × Առաջին շերտի բուֆեր (ըստ ցանկության)

* 5 × Առաջին շղթայի բուֆերը չի պարունակում dNTP, խնդրում ենք ավելացնել dNTPs ռեակցիայի համակարգը պատրաստելիս

Առաջարկվող հայտ

1.Մեկ քայլ qRT-PCR.

2.ՌՆԹ վիրուսի հայտնաբերում.

Պահպանման պայման

-20°C երկարատև պահպանման համար, օգտագործելուց առաջ պետք է լավ խառնել, խուսափել հաճախակի սառցակալումից:

Միավորի սահմանում

Մեկ միավորը ներառում է 1 նմոլ dTTP 10 րոպեում 37°C ջերմաստիճանում՝ օգտագործելով poly(A)•oligo(dT)₂₅որպես ձևանմուշ/այբբենարան։

Որակի հսկողություն

1.SDS-PAGE էլեկտրոֆորետիկ մաքրությունը ավելի քան 98%:

2.Ուժեղացման զգայունություն, խմբաքանակի հսկողություն, կայունություն:

3.Չկա էկզոգեն նուկլեազային ակտիվություն, չկա էկզոգեն էնդոնուկլեազ կամ էկզոնուկլեազային աղտոտում

Reaction Setup for First Chain Reaction Solution

1.Ռեակցիոն խառնուրդի պատրաստում

Նշումներ:a/b. Խնդրում ենք ընտրել տարբեր տեսակի այբբենարաններ՝ ըստ ձեր փորձարարական կարիքների:

2.Տաքացնել 65°C-ում 5 րոպե և արագ սառեցնել սառույցի վրա 2 րոպե:

3.Վերոնշյալ համակարգին ավելացրեք հետևյալ բաղադրիչները 20 մկլ ընդհանուր ծավալով և նրբորեն խառնեք.

4. Խնդրում ենք ռեակցիան կատարել հետևյալ պայմանների համաձայն.

(1) Եթե օգտագործվում է Random Primer, ռեակցիան պետք է իրականացվի 25℃ ջերմաստիճանում 10 րոպե, իսկ հետո 50℃ ջերմաստիճանում 30-60 րոպե;

(2) Եթե օգտագործվում են Oligo dT կամ հատուկ պրիմերներ, ռեակցիան պետք է իրականացվի 50℃ ջերմաստիճանում 30~60 րոպե:

5.Տաքացրեք 95℃ 5 րոպե՝ Neoscript հակադարձ տրանսկրիպտազը ապաակտիվացնելու և ռեակցիան դադարեցնելու համար:

6.Հակադարձ արտագրման արտադրանքը կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել PCR ռեակցիայի և ֆլուորեսցենտային քանակական PCR ռեակցիայի մեջ կամ երկար ժամանակ պահել -20℃ ջերմաստիճանում:

ՊՇՌ Ռգործողություն:

1.Ռեակցիոն խառնուրդի պատրաստում

Նշումներ:ա. Եթե առաջին շղթայական ռեակցիայի լուծույթը ավելացվի չափազանց շատ, PCR ռեակցիան կարող է արգելակվել:

2.PCR արձագանքման կարգը

Նշումներ

1.Հարմար է հակադարձ տառադարձման ջերմաստիճանի օպտիմալացման համար 42℃~55℃ միջակայքում:

2.Այն ունի ավելի լավ կայունություն, հարմար է բարձր ջերմաստիճանի հակադարձ տառադարձման ուժեղացման համար:Բացի այդ, այն բարենպաստ է ՌՆԹ-ի բարդ կառուցվածքային շրջաններով արդյունավետ անցնելու համար:Նաև այնհարմար է մեկ քայլով մուլտիպլեքսային ֆլուորեսցենտային քանակական RT-PCR հայտնաբերման համար:

3.Լավ համատեղելի է տարբեր PCR ուժեղացման ֆերմենտների հետ և հարմար է բարձր զգայունության RT-PCR ռեակցիաների համար:

4.Հարմար է բարձր զգայունության մեկ քայլ ֆլուորեսցենտային քանակական RT-PCR ռեակցիայի համար, արդյունավետորեն բարելավում է կաղապարների ցածր կոնցենտրացիայի հայտնաբերման արագությունը:

5.Հարմար է cDNA գրադարանի կառուցման համար: