DNase I
DNase I-ը (Դեզօքսիռիբոնուկլեազ I) էնդոդեօքսիռիբոնուկլեազ է, որը կարող է մարսել մեկ կամ երկշղթա ԴՆԹ:Այն ճանաչում և ճեղքում է ֆոսֆոդիստերային կապերը՝ արտադրելով մոնոդեօքսինուկլեոտիդներ կամ միակողմանի կամ երկշղթա օլիգոդեօքսինուկլեոտիդներ՝ ֆոսֆատային խմբերով 5'-տերմինալում և հիդրոքսիլ՝ 3'-տերմինալում:DNase I-ի ակտիվությունը կախված է Ca2+-ից և կարող է ակտիվանալ երկվալենտ մետաղական իոնների միջոցով, ինչպիսիք են Mn2+ և Zn2+:5mM Ca2+-ը պաշտպանում է ֆերմենտը հիդրոլիզից:Mg2+-ի առկայության դեպքում ֆերմենտը կարող է պատահականորեն ճանաչել և կտրել ԴՆԹ-ի ցանկացած շղթայի ցանկացած տեղ:Mn2+-ի առկայության դեպքում ԴՆԹ-ի կրկնակի շղթաները կարող են միաժամանակ ճանաչվել և ճեղքվել գրեթե նույն տեղում՝ ձևավորելով հարթ ծայրի ԴՆԹ-ի բեկորներ կամ 1-2 նուկլեոտիդներով դուրս ցցված ԴՆԹ-ի կպչուն բեկորներ:
Ապրանքի հատկություն
Տավարի ենթաստամոքսային գեղձի DNase I-ն արտահայտվել է խմորիչ արտահայտման համակարգում և մաքրվել:
Cբաղադրիչները
| Բաղադրիչ | Ծավալը | |||
| 0.1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU | |
| DNase I, RNase առանց | 20 մլ | 200 մլ | 1մլ | 10 մլ |
| 10×DNase I բուֆեր | 1մլ | 1մլ | 5×1 մլ | 5×10 մլ |
Տրանսպորտ և պահեստավորում
1. Պահպանման կայունություն. – 15℃~-25℃ պահեստավորման համար;
2. Տրանսպորտի կայունություն. Տրանսպորտ սառցե տոպրակների տակ;
3. Մատակարարվում է. 10 մՄ Տրիս-HCl, 2 մՄ CaCl2, 50% գլիցերին, pH 7.6 25℃ ջերմաստիճանում:
Միավորի սահմանում
Մեկ միավորը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակություն, որն ամբողջությամբ կքայքայի 1 մկգ pBR322 ԴՆԹ-ն 10 րոպեում 37°C ջերմաստիճանում:
Որակի հսկողություն
RNase:5 U DNase I-ը 1,6 μg MS2 RNA-ով 4 ժամվա ընթացքում 37 ℃ ջերմաստիճանում չի տալիս քայքայումը, ինչպես որոշվում է ագարոզայի գելի էլեկտրոֆորեզով:
Բակտերիալ Էնդոտոքսին.LAL-թեստ, ըստ չինական Pharmacopoeia IV 2020 հրատարակության, գելի սահմանաչափի փորձարկման մեթոդ, ընդհանուր կանոն (1143):Բակտերիալ էնդոտոքսինի պարունակությունը պետք է լինի ≤10 ԵՄ/մգ:
Օգտագործման հրահանգներ
1. Պատրաստեք ռեակցիայի լուծույթը RNase-ից զերծ խողովակում՝ համաձայն ստորև թվարկված համամասնությունների.
| Բաղադրիչ | Ծավալը |
| ՌՆԹ | X μg |
| 10 × DNase I բուֆեր | 1 մլ |
| DNase I, RNase առանց (5U/μL) | 1 U մեկ μg ՌՆԹ-ի համար |
| դդՀ2O | Մինչև 10 մլ |
2,37 ℃ 15 րոպե;
3. Ավելացրե՛ք ավարտման բուֆերը՝ ռեակցիան դադարեցնելու համար, և տաքացրե՛ք 65℃ ջերմաստիճանում 10 րոպե՝ DNase I-ն ապաակտիվացնելու համար: Նմուշը կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել տառադարձման հաջորդ փորձի համար:
Նշումներ
1. Օգտագործեք 1U DNase I մեկ μg ՌՆԹ-ի համար, կամ 1U DNase I՝ 1մկգ-ից պակաս ՌՆԹ-ի համար:
2. EDTA-ն պետք է ավելացվի 5 մՄ վերջնական կոնցենտրացիայի մեջ՝ պաշտպանելու ՌՆԹ-ն ֆերմենտների ապաակտիվացման ժամանակ քայքայվելուց:
