CHO HCP ELISA հավաքածու
Այս վերլուծության մեջ օգտագործվում է մեկ քայլ իմունոսորբենտ ELISA մեթոդ:CHOK1 HCP պարունակող նմուշները միաժամանակ արձագանքում են HRP պիտակավորված այծի հակա-CHOK1 հակամարմինների և հակա-CHOK1 հակամարմինների հետ, որոնք պատված են ELISA ափսեի վրա՝ վերջապես ձևավորելով պինդ ֆազային հակամարմին-HCP պիտակավորված հակամարմինների սենդվիչ համալիր:Չկապված հակագեն-հակամարմինը կարող է հեռացվել ELISA թիթեղը լվանալու միջոցով:TMB սուբստրատը ավելացվում է ջրհորի մեջ՝ բավարար ռեակցիայի համար:Գույնի զարգացումը դադարեցվում է կանգառի լուծույթը ավելացնելուց հետո, և ռեակցիայի լուծույթի OD կամ ներծծման արժեքը 450/650 նմ-ում ընթերցվում է միկրոափսե ընթերցողով:OD արժեքը կամ կլանման արժեքը համաչափ է լուծույթում HCP պարունակությանը:Դրանից լուծույթում HCP-ի կոնցենտրացիան կարող է հաշվարկվել ստանդարտ կորի համաձայն:
Դիմում
Այս հավաքածուն օգտագործվում է նմուշներում CHOK1 հյուրընկալող բջիջների սպիտակուցի մնացորդների պարունակությունը քանակապես հայտնաբերելու համար:
Cբաղադրիչները
| S/N | Բաղադրիչ | Համակենտրոնացում | Պահպանման պայմանները |
| 1 | CHOK1 HCP ստանդարտ | 0,5 մգ/մլ | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 մգ/մլ | ≤–20℃, պաշտպանել լույսից |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, պաշտպանել լույսից |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Stop լուծում | NA | RT |
| 6 | Microplate sealers | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Բարձր կլանման նախնական ծածկույթի ափսեներ | NA | 2-8℃ |
Պահանջվում է սարքավորումներ
| Սպառվող նյութեր / Սարքավորումներ | Արտադրություն | Կատալոգ |
| Միկրոափսե ընթերցող | Մոլեկուլային սարքեր | Spectra Max M5, M5e կամ համարժեք |
| Ջերմախառնիչ | Էպենդորֆ | Eppendorf/5355 կամ համարժեք |
| Vortex խառնիչ | ԻԿԱ | MS3 թվային կամ համարժեք |
Պահպանում և կայունություն
1.Տրանսպորտ -25~-15°C:
2.Պահպանման պայմանները ներկայացված են Աղյուսակ 1-ում.1-2 բաղադրիչները պահվում են ≤–20°C, 5-6-ը պահվում են RT,3,4, 7, 8-ը պահվում են 2-8℃ ջերմաստիճանում;գործողության ժամկետը 12 ամիս է։
Ապրանքի պարամետրեր
1.Զգայունություն՝ 1 նգ/մլ
2.Հայտնաբերման միջակայքը՝ 3-100նգ/մլ
3.Ճշգրտություն՝ ներվերլուծության CV≤ 10%, միջվերլուծական CV≤ 15%
4.HCP ծածկույթ՝ >80%
5.Առանձնահատկություն. Այս հավաքածուն ունիվերսալ է, քանի որ այն հատուկ արձագանքում է CHOK1 HCP-ին՝ անկախ մաքրման գործընթացից:
Ռեագենտի պատրաստում
1.PBST 0.05%
Վերցրեք 15 մլ 20×PBST 0,05%, նոսրացված ddH-ում2O, և կազմել մինչև 300 մլ:
2.1.0% BSA
Վերցրեք 1 գ BSA շշից և նոսրացրեք 100 մլ PBST 0,05%, լավ խառնեք մինչև ամբողջովին լուծարվի և պահեք 2-8°C ջերմաստիճանում:Պատրաստված նոսրացման բուֆերը գործում է 7 օր:Խորհուրդ է տրվում պատրաստել ըստ անհրաժեշտության։
3.Հայտնաբերման լուծույթ 2 μg/mL
Վերցրեք 48 մկլ 0.5 մգ/մլ Anti-CHO HCP-HRP և նոսրացրեք 11,952 մկլ 1% BSA-ի մեջ՝ 2 մկգ/մլ հայտնաբերման լուծույթի վերջնական կոնցենտրացիան ստանալու համար:
4.QC և CHOK1 HCP ստանդարտների պատրաստում
| Խողովակ Ոչ | Օրիգինալ | Համակենտրոնացում | Ծավալը | 1% BSA | ընդհանուր Ծավալ | Վերջնական |
| A | Ստանդարտ | 0,5 մգ/մլ | 10 | 490 թ | 500 | 10000 |
| B | A | 10000 | 50 | 450 թ | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 թ | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 թ | 175 | 375 թ | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 թ | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 թ | 200 թ | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 թ | 200 թ | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 թ | 200 թ | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 թ | 250 | 20 |
Աղյուսակ. QC-ի և ստանդարտների պատրաստում
Վերլուծության կարգը
1.Պատրաստեք ռեակտիվները, ինչպես նշված է «Ռեագենտի պատրաստում» վերևում:
2.Վերցրեք 50 μL ստանդարտներ, նմուշներ և QCs (տես Աղյուսակ 3) յուրաքանչյուր հորի մեջ, այնուհետև ավելացրեք 100 μL հայտնաբերման լուծույթ (2 μg/mL);Ծածկեք ափսեը հերմետիկով և դրեք ELISA թիթեղը ջերմախառնիչի վրա:Ինկուբացնել 500 rpm 25±3℃ 2 ժամ:
3.Շրջեք միկրոսալիկը լվացարանի մեջ և թափեք ծածկույթի լուծույթը:300 մկլ PBST 0,05% յուրաքանչյուր հորի մեջ լցրեք ELISA ափսեը լվանալու և լուծույթը հեռացնելու համար և կրկնեք լվացումը 3 անգամ:Շրջեք ափսեը մաքուր թղթե սրբիչի վրա և չորացրեք:
4.Յուրաքանչյուր հորին ավելացրեք 100 μL TMB ենթաշերտ (տես Աղյուսակ 1), փակեք ELISA ափսեը և ինկուբացրեք մթության մեջ 25±3℃ ջերմաստիճանում 15 րոպե:
5.Յուրաքանչյուր ջրհորի մեջ լցրեք 100 մկլ կանգառի լուծույթ:
6.Չափել ներծծումը 450/650 նմ ալիքի երկարության վրա միկրոպլատների ընթերցիչով:
7.Վերլուծեք տվյալները SoftMax-ի կամ համարժեք ծրագրաշարի միջոցով:Ստանդարտ կորը գծագրեք՝ օգտագործելով չորս պարամետր լոգիստիկ ռեգրեսիոն մոդել:
Ստանդարտ կորի օրինակ
ԾԱՆՈԹՈՒԹՅՈՒՆ. Եթե նմուշում HCP-ի կոնցենտրացիան գերազանցում է ստանդարտ կորի վերին սահմանը, ապա փորձարկումից առաջ այն պետք է պատշաճ կերպով նոսրացվի նոսրացման բուֆերով:
ԾԱՆՈԹԱԳՐՈՒԹՅՈՒՆՆԵՐ
Ստոպ լուծույթը 2M ծծմբաթթու է, խնդրում ենք զգույշ վարվել, որպեսզի խուսափեք շաղ տալուց:
